利用线粒体膜电位测定筛选参与细胞凋亡的人类新基因.pdfVIP

噩噩理E PIIJlj 生物由生物辖理进展 t t:2522):ZJT荡的and Biophysics 利用线粒体膜电位测定筛选 参与细胞)用亡的人类新基因* 骆叶川王兰山高霞。邓唯唯1)于鹏1) 张晨颖1)陆 F日1)都缸3 石太平 1) .. (1)国家人类基因组北方研究中心，北京 100176; n北京大学医学部基础医学院医学免疫学实验室，北京 100083; }北京中医药大学基础医学院免疫学教研室，北京 100029) 搞要 细胞弱亡(apoptosis)属于细胞程序化死亡(progr部恕nedcell d倒也)，是细胞内涉及黠许多生化反应的复杂过程.建立了基 于细胞水平的调亡筛选模型，用于第选人类基因组中功能未知的序列，以发现与绍跑踊亡梧关的新基因通过梅建人类未知 基园的表达文库，并将未知基嚣表达载体瞬时转染HeLa细胞，用阳离子染料JC-l 标记HeLa细胞线粒体内族并检测线粒体 跨摸电位，用流式细胞术进行陆性结果的验证，经过对未知基因表达文库内 600 个新基齿的筛选，得到7 个线粒体跨膜电位 下降相关新基因 (CHMP6、 CGI-38、 hCAP-H2、 NUDTl6Ll、 ARMCl、 PHF17 和 FLJ2110匀，经实验验证，其中 3 个基因 (CI翻到、 CGI-38 和 hCAP-H2)与细胞揭亡梧关.结果表明，所建立的基于细胞的揭亡筛选模型稳定高效， 3 个绍胞凋亡梧关 基因将被进行深入研究. 关键词 高通量筛选，组胞凋亡，线粒体膜电位，荧光，新基因 学科分类号 Q987 , R34 髓着人类基因组蜒序工作的完成，大量未知功 H+ 梯度靖夫，呼吸键膜偶联，能量产生中新，由 于本和溶质的进入，基层肿胀并导致外摸破裂，释 能的基因被发现，基于细跑的功能基因高通量第选 技术迅速形成和发展[1] 人的借助 RNA 干就叭报 放出包括结跑色素c 在内的各种洁性蛋白质问.正因 告基~[习、摇撞芯片[4]等技术手段研究未知基国的 为线粒体在凋亡中的重要性，线粒体跨膜屯往是常 甫的早期属亡的检黯指标之一， 房能，成功地发璜了一些具有重要生理病理意义民 JC-l 是一手中陌离子染料，在线粒体中表现出 新基因，为各种生理病理机制的深入研究提供了条 膜电位依赖性聚集，能灵敏地反映摇胞线粒钵跨膜 件，也为疾病治疗靶标的发现和基因药物的开发打 电位改变情况.当线粒体跨麓电位来降佳时， JC-l 下了基础. 聚合而被检割鬓红色发射光:当线粒体跨膜电位于 细胞凋亡(碍。ptosis) 属于细跑程序化死亡 (progr姐nned cell death)，是细跑内涉及到许多生化 降时， JC-l 以单体形式存在，被检测到绿色发射 光叹因此， JC-l 作为一种线粒体探针，应m于凋 反应的复杂过程.凋亡过程中的多种关键事件与线 亡旱期线粒体跨膜电位下降的检测.基于 JC-l 染料 粒体有关，包括四年出e 激活物的释放(如细胞色 对线粒体膜电位下降的诱导剂和盟潭剂进行第选的 素c)、电子转移功能的丧失、线粒体跨膜电位的降 偎乃至消失及 Bcl-2 家族蛋白的参