金自组膜免疫芯片的研制.PDF

( ) 第 30 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究报告 第 7 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2002 年 7 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 784～787 金自组膜免疫芯片的研制 姜雄平 许丹科　马立人 (总后勤部卫生部药品仪器检验所 , 北京 100071) (军事医学科学院放射医学研究所 , 北京 100850) 摘 　要 　用光刻掩膜真空沉积技术在石英晶片上沉积上一层 8 列 ×6 行的金膜阵列 ,用金表面 N乙酰半胱氨 酸分子自组装及 EDC 偶联技术将人 IgG、兔 IgG 和鼠 IgG 固定在石英膜阵列上来制备免疫芯片。用 FITC 荧光 标记兔抗羊 IgG、夹心法可同时测定羊抗人 IgG、羊抗兔 IgG 和羊抗鼠 IgG。用样点荧光强度与空白比 Rf 作定 量指标。在抗体浓度 0. 5～100 mgL 内,Rf 与抗体浓度的对数成线性关系。最低可检出 0. 5 mgL 的羊抗兔 IgG。测定仅需样品 150 μ L ,2～3 h ,适合于快速微量分析。 关键词 　金自组膜 ,免疫芯片 1 　引　　言 生物芯片的初衷是基因芯片 ,用于基因的测序 ,随着生物芯片的发展又出现了蛋白质芯片、免疫芯 片等。免疫芯片实际上是单个免疫传感器的集合 ,系在芯片片基上固定了数种、数十种甚至数千种的免 疫识别分子 ,通常以激光共聚焦芯片扫描仪或 CCD 芯片扫描仪进行荧光测定1 ,2 。已报道的免疫芯片 1 ～7 5 所采用的介质多为玻璃或石英玻片 。测定的对象多为蛋白质 , 目前已有测定细菌和病毒的报道 。 由于玻璃或石英对蛋白质的非特性吸附较强,往往使测定的背景较高7 ,8 。本实验采用光刻掩膜真空沉 积技术在石英片上沉积上金膜点阵6 ,7 ,9 , 以金膜点阵作为免疫芯片的介质,用金表面自组装技术将 3 种 ( ) IgG 免疫球蛋白 固定在金膜上 ,采用异硫氰酸荧光素标记兔抗羊 IgG、夹心法荧光测定。由于金膜对蛋 白质的非特异性吸咐较小,可克服玻璃或石英的缺陷。采用此免疫芯片建立了同时测定多种 IgG 抗体 的免疫分析方法 ,最低检测量可达 75 ng 。 2 　实验部分 2. 1 　材料与仪器 ( ) ( ( ) ) ( N乙酰半胱氨酸 日本Sigma 公司 ; EDC 1乙基3 3二甲氨基 碳二亚胺盐酸盐 上海丽珠东风生 ) ( ) ( 物技术有限公司 ;兔 IgG、异硫氰酸荧光素 FITC 标记兔抗羊 IgG、鼠 IgG、羊抗鼠 IgG 血清 军事医学科 )