雷帕霉素对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响.pdfVIP

山东医药2007年第47卷第36期 雷帕霉素对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响 牛慧彦，何 平 (中国医科大学附属盛京医院，辽宁沈阳110000) [摘要] 将不同浓度雷帕霉素作用于肺腺癌A549细胞。用MTF比色法测定细胞生长抑制率，流式细胞仪检 测细胞周期和细胞凋亡情况。结果雷帕霉素对肺腺癌细胞有显著的抑制作用，呈剂量一效应和时间一效应关系； 流式细胞仪检测示雷帕霉素可将肺腺癌细胞阻滞于G，期，S期合成减少；同时细胞凋亡率随着雷帕霉素浓度增加 而增加。认为雷帕霉素能有效地抑制肺腺癌细胞A549增殖，阻滞细胞周期并诱导其发生凋亡。 [关键词] 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白；A549细胞系；细胞周期；凋亡 [中图分类号] 11734．2 [文献标识码] B [文章编号] 1002~66X(2007)36-0064-02 研究证实，抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 — 一 (mTOR)能够抑制多种恶性肿瘤生长 J。2006年7 l2．5 nM — 25 nM 月一2007年4月，我们将mTOR特异性抑制剂雷帕 50 nM 霉素作用于肺腺腺癌A549细胞，观察其对肺腺癌细 ∞∞舳 ∞如∞ 加m 0 loo nM 2oo nM 胞增殖及凋亡的影响。现将结果报告如下。 1 材料与方法 1．1 细胞培养 将人肺腺癌细胞系A549细胞置于 、√ 褂 含10％胎牛血清、100 U／ml青霉素、100 U／ml链霉 磊 素的RPMI．1640培养液中，37℃、5％CO2条件下培 养，2—3 d传代一次。细胞呈贴壁生长。 1．2 细胞生长抑制率测算 将A549细胞悬液浓度 调整为1×10。／ml，每孔200 接种于96孔板。实 0 24 36 48 72 验组分别加入12．5、25、50、100、200 nM的雷帕霉 时间(}1) 素，对照组不加药，另设空白对照孔。每组设3个平 图1 不同浓度雷帕霉素作用于肺癌细胞A549不同 行孔。继续培养，分别在24、36、48、72 h加入MTr 时间后的增殖抑制率 不同浓度雷帕霉素作用24 h后，肺癌A549细 (5 g／L)20 ，放置孵箱内4 h后弃上清加入150 胞周期分布和凋亡率见表1。 的二甲基亚砜(DMSO)，震荡15 min，用全自动酶标 表1 不同浓度雷帕霉素对肺癌A549细胞周期 仪检测490 nm处的吸光光度值(A值)。抑制率 分布和凋亡率的影响 (％)=(A对照一A实验)／(A对照一A空白)×100％。 组别 细胞周期(％) 增殖抑制 1．3 细胞周期检测 对数生长期的A549细胞，用