甲苯胺蓝线扫极谱法测定硫酸软骨素.pdfVIP

第35卷 分析化学(FENxJHuAxuE)研究报告 第ll期 0f ChineseJoumal 1548，1552 2(Ⅺ7年11月 An出ybcalChemis‘ry 甲苯胺蓝线扫极谱法测定硫酸软骨素 孙伟’ 赵娜徐啸焦奎 (青岛科技大学化学与分子工程学院．青岛266042) 摘要以电活性染料甲苯胺蓝(toluidinehlue．TB)为生物探针，建立了一种线扫极谱法测生物多糖硫酸软 mitin 骨素(chondsulfate，cs)的电化学分析新方法。在pH 一0．04 v(埘．scE)处有一个灵敏的线性扫描二阶导数极谱还原峰。当在溶液中加入一定量的cs后，峰电 流降低，但峰电位基本不变。这是由于两者在溶液中发生静电结合反应生成一种生物超分子复合物，导致其 0— 扩散系数降低，进而峰电流降低。利用峰电流降低建立了测定cs的电化学分析新方法。线性范围为6 9 30．0皿∥L；检出限为1mg／L(3盯)。本方法成功应用于cs模拟样品的测定，利用电化学数据求解了结合 比和结合常数。 关键词硫酸软骨素，甲苯胺蓝，线扫极谱法，相互作用 1 引 言 硫酸软骨素(cs)是广泛存在于动物软骨组织中的一类酸性粘多糖。它是由D．葡萄糖醛酸和 Ⅳ．乙酰基．D-氨基半乳糖以l，3一糖苷键结合的二糖为基本单元聚合而成的太分子多糖。cs在水溶液中 易于解离带负电荷，具有许多重要的生理活性和药理作用。如特殊的免疫抑制作用．减少局部胆固醇沉 积，抗动脉粥状硬化等作用”’2J，在药学、化妆品等领域已经得到了广泛的应用”’4】。 CS的常用分析方法有比浊法、分光光度法和高效液相色谱法等。姬胜利等”1利用cs与氯化十六 烷基吡啶的相互作用，建立了测定cs含量的比浊测定法；蒋志良等”1对维多利亚蓝B与cs反应生成 有色产物进行分光光度分析；牛增元等…利用反相离子对高效液相色谱法测定cs，线性范围为 o．4—8．0斗g；但这些方法需经水解、衍生等反应后再定量测定”1。极谱分析法是以滴汞电极为工作电 极的一种电化学分析方法，具有操作简单、重现性好和准确度高的优点，已应用于DNA、蛋白质、透明质 酸和肝素等生物大分子的测定”““，但尚未见应用于cs电化学法测定的报道。甲苯胺蓝(TB)是一种 阳离子吩噻嗪类染料，已用于光度法测定DNA”…。本工作研究了TB与cs相互作用的电化学变化，在 B．R缓冲溶液(pH5．0)中，其峰电流随着cs的加入而降低，可以用于cs的检测，进而建立了一种简单 方便的线扫极谱测定cs的新方法。 2实验部分 2．1仪器与试剂 JP-303型极谱分析仪(成都仪器厂)；三电极系统：滴汞电极为工作电极，饱和甘汞电极为参比电 50 极，铂丝为对电极；pHs-25型酸度计(上海雷磁仪器厂)；caryPmbe型紫外．可见分光光度计(澳大利 亚Varian公司)。 1．O×10～mol／L甲苯胺蓝(TB，上海生化试剂有限公司)；1．0g／L硫酸软骨素(cs，山东临沂天利 生化有限公司，平均分子量为2万)储备液，4℃冰箱保存，使用时再进行稀释。0．2moL／LB．R系列缓冲 溶液。所用试剂均为分析纯。实验用水为二次石英蒸馏水。 2．2实验方法 在10mL比色管中，依次加入B—R缓冲溶液(pH5．O)1．5mL‘LO×10_。moL／LTB溶液0．5mL和 2007．04．14收稿；2007．07_23接受 本文系围家自然科学基金(N曲20635020)和青岛科技大学大学生科技创新基金资助项日 ·E_眦Il：酬ei@qust．一uen 第11期 孙伟等：甲苯胺蓝线扫极谱法测定硫酸软旨素