2011年执业药师考试辅导《药物分析》讲义0701.docVIP

第七章　体内药物分析法 　　考试要求： 体内药物分析法 （一）体内样品种类 1.血样 血样的采集与血浆和血清的制备 2.尿样 尿样的分类与采集和处理方法 3.唾液 唾液及其采集方法 （二）体内样品处理 体内样品处理的常用方法 （1）去除蛋白质法（2）缀合物水解法（3）萃取分离法（4）化学衍生化法 （三）体内样品测定 1.体内样品测定的常用方法 免疫分析法和色谱分析法 2.定量分析方法验证 特异性、标准曲线与线性范围、精密度与准确度、定量下限、样品稳定性、提取回收率、质控样品与质量控制 3.应用 （1）治疗药物监测（2）药代动力学 　　药物的体内过程：　　　　治疗药物监测：以灵敏可靠的方法，检测病人在给药后的血液或其他体液中的药物浓度，并应用药物代谢动力学理论，指导最适个体化用药方案的制定和调整，以避免用药剂量过大及可能产生的毒性反应，保证药物治疗的有效性和安全性。 第一节　体内样品种类 　　　　体内样品的采集时间 目的 取样时间 确定、调整用药方案 用药稳态后 临床治疗药物监测 用药稳态后 急性药物中毒诊断 用药后立即 药动学、药效学 给药前、给药后多时间点 　　　　一、血样　　　　血清、血浆的区别：　　加入抗凝剂后，全血离心制的血浆。不加抗凝剂，自然沉降后离心制的血清。　　采血后应尽快（一般不超过2h ）分离出血浆、血清，再冰冻保存（-20℃）。　　二、尿液　　用于药物剂量回收、药物肾清除率及生物利用度的研究，以及药物代谢物及其代谢途径、类型和速率等的研究。　　PH：4.8～8.0。　　1.尿液的分类　　　　2.尿液的采集　　测定尿液中药物浓度——自然排尿、时间尿；　　测定尿液中药物总量——自然排尿、各时间段全部尿液。　　3.尿液的处理方法　　保存：低温保存，或加入防腐剂。　　处理：酸、酶水解。　　三、唾液　　PH：6.2-7.6。　　1.唾液的采集　　漱口后15min。　　　　唾液的处理方法　　保存：冷藏。　　处理：去除泡沫，离心取上清液，加碱处理（分离黏蛋白）。 第二节　体内样品处理 　　一、体内样品处理的目的　　　　二、体内样品处理的常用方法　　　　1.去除蛋白质法　　去除蛋白质的意义——使结合型药物释放出来，得到较“干净”的提取液，消除对测定的干扰。　　去除蛋白质的方法：　　◆蛋白质沉淀法　　√加与水混溶的有机溶剂脱水　　√加入强酸生成不溶性盐　　√加无机盐盐析　　◆蛋白分解法——蛋白水解酶（枯草菌溶素）　　2.缀合物水解法　　缀合物水解的意义——药物经二相代谢可以形成葡糖醛酸苷或硫酸酯缀合物，为了准确测定体内样品中药物的含量，首先需将缀合物水解释放出缀合的药物或其代谢物后，再进行进一步的处理测定。　　缀合物水解的方法：　　◆酸水解（HCl）：简便、快速，但专一性差　　◆酶水解：β-葡萄糖醛酸苷酶、硫酸酯酶、两者混合酶，专属性高　　3.分离纯化与浓集法　　分离、纯化、浓集的意义——提高分析的特异性和灵敏度。　　常用方法：　　◆液-液萃取——选用与水不相混溶的有机溶剂进行提取　　溶剂提取的关键问题是——提取的选择性和提取率的重复性 　　影响提取率的因素主要有： 水相pH、提取溶剂、离子强度　　◆离子对萃取法　　◆固相萃取法——利用柱色谱进行分离　　固相萃取法：　　利用柱色谱分离方法，将具有吸附、分配或离子交换性质的大比表面积吸附填料作为萃取剂填成小柱，以适宜溶剂淋洗活化后，将体内样品通过小柱，微量的待测成分被保留，而内源性干扰物质则大都不被保留而通过，用淋洗溶剂进一步洗去干扰物后，再用洗脱溶剂将药物洗脱收集，挥干溶剂后，用少量溶剂复溶进行分析。　　●选择固相萃取小柱　　　　●活化——加样——洗涤——洗脱　　　　插入视频　　4.化学衍生化法　　衍生化目的：　　●增加组分的稳定性；　　●改善被测组分的色谱行为；　　●增加被测物的检测灵敏度和选择性；　　●提高对光学异构体分离的能力。　　衍生化方法：　　●GC——硅烷化、酰化、烷基化；　　●HPLC——荧胺、丹酰氯、邻苯二醛（柱前衍生化、柱后衍生化）；　　●手性衍生化法。 第三节　体内样品测定 　　一、常用测定方法 　 灵敏度 专属性 适用范围 免疫分析法 ++++ ++ 临床药物监测 色谱分析法 +++ +++ 药代动力学 　　二、定量分析方验证　　1.特异性　　内源性物质的干扰、代谢产物的干扰、同用药物的干扰。　　要求：6个不同来源的空白体内样品色谱图、空白体内样品外加标准物质色谱图（注明浓度）及用药后的体内样品色谱图。（体外分析的专属性）　　2.标准曲线与线