昆明小鼠未成熟卵母细胞OPS和SSV冷冻保存的比较.pdfVIP

第24卷 第5期 实验动物科学 V0l、24 No、5 2007年 1O月 LABORATORY ANIMAL SCIENCE October 2oo7 匈 研究·论著 、 ： 、c： 、 ： 》 昆明小鼠未成熟卵母细胞OPS和SSV冷冻保存的比较 彭礼繁 罗光彬 朱增娟 (沈阳农业大学动物胚胎工程实验室，沈阳 110161) 摘要：目的 寻找昆明小鼠卵母细胞冷冻保存效率的新途径。方法 选用5～6周龄雌性昆明小鼠的未成熟卵母 细胞，在不同前处理液(10％EG或 10％EG+10％DMSO)中平衡 5 min，然后在冷冻液(EFS30、EFS40、EDFS30或 EDFS40)中平衡3O s后进行OPS(Open puHed straw)法和SSV(Solid—surface vitrification)法玻璃化冷冻保存。结果 小 鼠未成熟卵母细胞的OPS法冷冻保存中，用EFS液冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为84．4％，成熟率低于 16、7％；而在 SSV法冷冻保存中，用 EFS液冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为86、O％，成熟率为46．5％。 OPS法和SSV法冷冻小鼠未成熟卵母细胞形态正常率为91．6％和91．4％，与对照组间差异较显著(P0、O1)；成熟 率为42．9％和59、1％，与对照组差异极显著(PO．O1)。结论 多种抗冻保护剂组合使用效果好于单种抗冻保护 剂；EDFS冷冻液冷冻保存效果好于EFS，尤其是EDFS30；OPS法可以有效地冷冻保存小鼠未成熟卵母细胞，且新型 玻璃化冷冻法SSV法冷冻保存效果优于OPS法。 关键词：小鼠；卵母细胞；OPS；SSV 中图分类号：R一332 文献标识码：A 文章编号：1006—6179(2007)05—0013—04 哺乳动物卵母细胞的有效冷冻保存是保护品种 OPS法和SSV法玻璃化冷冻保存研究，以期从中找 资源和拯救濒危动物不可缺少的技术保障之一，是 到提高卵母细胞冷冻保存效率的新途径。 加快家畜品种改良和胚胎移植技术产业化的重要组 成部分，同时也为克隆、转基因动物生产和显微受精 1 材料与方法 等现代生物技术提供了丰富而廉价的卵母细胞。但 是到目前为止，卵母细胞的冷冻保存技术尚不成熟， 1．1 材料 开展配子冷冻研究不但可以提高其存活率，而且有 1．1．1 实验动物：5～6周龄的昆明白系雌鼠，购自 利于冷冻保存机制的探索。通过不同前处理和冷冻 中国医科大学实验动物中心，合格证号：SCXK(辽) 法的比较，可优化出提高卵母细胞冷冻保存效率的 2004．0003。 方法，为卵母细胞冷冻研究提供基础资料 。1977 1．1．2 主要仪器设备：荧光显微镜(VANOX．1000)， 年，Whittingham首次利用慢速冷冻法成功地保存了 Et本 OLYMPUS公司；生物显微镜附显相系统(JVC 小鼠成熟卵母细胞并获得产仔。许多研究者致力于 KY．1900E)，Et本 OLYMPUS公司；CO，培养箱 人及家畜的卵母细胞冷冻保存技术的研究，并有初 (BB5060UV)，香港；倒置显微镜及显微操作系统 步成效。玻璃化冷冻因其具有方便实用的优势，在 (DMIRB)，德国徕卡公司；电子天平(BS210S)，德国 胚胎冷冻方面受到了人们极大的重视 。卵母细胞 赛多利斯公司；生物超净工作台(BCM．1000)，中国 的超低温冷冻保存方法大都是在胚胎冷冻保存方法 江苏苏净集团安泰公司；酸度计(A19．0031．10)，美国 的基础上逐步建立起来的。但卵母细胞玻璃化冷冻 ORION公司；多管架自动平衡离心机(TDZ5．WS)，湘 保存技术的研究与精液和胚胎冷冻