拟南芥抗致病疫霉突变体部分序列分析.pdfVIP

农业生物技术学报 Journal ofAgricultural Biotechnology 2007，15 (6)：1074~1075 · 研究简报· 拟南芥抗致病疫霉突变体部分序列分析水 毛 娜，刘颖超，董金皋” (河北农业大学真菌毒素实验室，保定071001) 关键词：拟南芥；致病疫霉；激活标签：TAIL．PCR 中国分类号：sl88 文献标识码：A 文章编号：1006．1304(2007)．06．1074．02 Partial Sequence Analysis of Arabidopsis thaliana Mutants against Infection ofPhytophthora infestans MAO Na，LIU Ying—chao，DONG Jin—gao” (MycotoxinLaboratory,AgriculturalUniversityofHebei,Baoding071001，China) K哆w瞳由：Ambidopsis thaliana；Phytophthora infestans；activating tagging；TAIL—PCR 目前获得拟南芥(Arabidopsis thaliana)突变体的主要方 mL乙醇、10 mL苯酚、10 mL水、10 mL 83％乳酸和10 mg台 法是采用激活标签法 (activation tagging)(Kakimoto．1996； 盘兰)中煮沸2-5 min后，用饱和水合氯醛(2．5 g／mL)溶液脱 Kardailsky et a1．，1 999)。本实验根据拟南芥突变体对致病疫霉 色，脱色后再用清水漂洗3~4次，加入50％的甘油，置显微镜 表现的抗性差异，利用TA1L-PCR技术对感致病疫霉的拟南 下观察。 芥突变体进行遗传分析，为克隆拟南芥抗致病疫霉基因提供 1．4 拟南芥突变株的PCR鉴定和TAJL．PCR 资料。 拟南芥基因组DNA的提取采用CTAB法，根据npt／1基 因序列，合成l对引物： 1 材料和方法 5-TCGCK3TATGACTGGGCACAACAGA-3’ 1．1拟南芥与致病疫霉 5-AAGAAGCK3GATAGAAGCK3GATGCG．3’。 拟南芥(Arabidopsis thaliana)的Columbia生态型由美国 选择TAIL．PCR特异性引物： Danforth植物科学中心夏亦芥博士惠赠。拟南芥IGDB．XVE LexA2：5-CTAATCGCA1vrATCATCCCCTCG．3’： 突变体种子由中国科学院遗传发育研究所左建儒研究员惠 LexA3：5-ATCATCCCCTCGACGTACTGTAC．3’： 赠。致病疫霉(Phytophthora infestans)由河北农业大学植物保 LexA4：5-CTGGTTTTATATACAGCAGTCGACG．3’： 护学院朱杰华教授惠赠。 LexA5：5-AGTCGAGGTAAGATTAGATATGG．3’。 1．2 拟南芥感致病疫霉突变体的表型鉴定 随机简并引物为： 选取拟南芥突变体的4周龄植株，用微量移液器在叶片 ADI：5’·(AGCT)