膀胱尿路上皮癌Fas相关死亡结构域蛋白表达及意义.docVIP

　　膀胱尿路上皮癌Fas相关死亡结构域蛋白表达及意义 【摘要】 目的 研究Fas相关死亡结构域 (FADD) 蛋白在膀胱尿路上皮癌（BUC）组织的表达，并探讨其与肿瘤生物学行为之间的关系。方法 采用免疫组化SP法检测68例BUC及13例正常膀胱黏膜组织FADD蛋白表达。原位杂交法检测其中34例BUC组织FADD mRNA 表达水平。结果 正常膀胱黏膜FADD蛋白呈阳性表达。FADD的阳性率在不同组织学分级、不同临床分期的BUC组织中差异均有极显著性(χ2=15.38、11.34，Plt;0.01)；复发组与未复发组FADD的阳性率分别为36.84%和53.33%,差异无显著意义(χ2=1.85，Pgt;0.05)。BUC组织中FADD mRNA阳性率为44.12%, FADD蛋白阳性率为47.06%,两者差异无统计学意义(χ2=0.06，Pgt;0.05)。结论 FADD表达异常在BUC的发展中可能起着重要作用, FADD阳性表达与BUC病理分级、浸润关系密切，但与BUC复发无关。 【关键词】 Fas相关死亡结构域蛋白；膀胱肿瘤；免疫组织化学；原位杂交 ［ABSTRACT］ Objective To investigate the Fas-associated death domain (FADD) protein and its biological behavior in bladder urothelial carcinoma (BUC). Methods The expressions of FADD in 68 BUC and 13 normal bladder tissue munohistochemical technique. Of RNA. Results The various exprssions of FADD al bladder mucosa; the differences of positive expression ong different histological grading and clinical staging (χ2=15.38,11.34;Plt;0.01); its expression in recurrent group and non-recurrent group RNA (χ2=0.06,Pgt;0.05)。 Conclusion The abnormal expression of FADD may play an important role in the development of BUC. The positive expression of FADD in the cancer is closely related to the pathological grading and invasion, but not related to its recurrence. ［KEY ）标准确定，其中浅表性(Tis~T1)肿瘤32例，浸润性(T2~T4)肿瘤36例。病理分级按世界卫生组织（厚连续组织切片，分别进行苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及原位杂交。所有病例术前均未经放疗、化疗及免疫治疗。 1.2 FADD蛋白检测 采用免疫组化SP法。山羊抗人FADD单克隆抗体为Santa Cruz Biotech公司产品,其工作浓度为1∶30；兔抗山羊血清及SP试剂盒为北京中山生物有限公司产品；DAB为Sigma公司产品。用已知肺癌阳性切片作阳性对照，用PBS代替山羊抗人FADD单克隆抗体作阴性对照，DAB显色，苏木精复染，中性树脂封片。具体操作步骤按试剂盒说明书进行。结果判定标准：FADD蛋白阳性细胞为胞浆内有棕黄色细颗粒；每张切片随机选择5个高倍视野, 每视野计数200个细胞(癌组织计数癌细胞,正常膀胱黏膜组织计数上皮细胞)，无阳性反应为阴性(-),阳性细胞数lt;25%为弱阳性(+),25%～75%为中度阳性(),gt;75%为强阳性()。 1.3 FADD核酸原位杂交 探针序列：5′-GACCCGTTCCTGGTGCTGCT-GCACTCGGTG-3′;5′-AGCTGGAGCGCGTGCAG-AGCGGCCTAGACC-3′;5′-GAGCAGAACGACCTGGAGCCCGGGCACACC-3′。实验严格按说明书进行,原位杂交阳性对照片由试剂盒提供,省去探针步骤为阴性对照。最后用DAB显色,镜下观察,FADD mRNA阳性细胞为胞质内有蓝色颗粒。结果判定标准: 采用半定量分析方法（AB值法），连续观察5个高倍视野，每视野计数200个癌细胞。以染色强度评分：0分为细胞无着色，1分为浅蓝色，2分为深蓝色；以显色细胞比例评分：l