自体外周血纯化CD34+细胞移植对系统性红斑狼疮.docVIP

　　自体外周血纯化CD34+细胞移植对系统性红斑狼疮 【关键词】 造血干细胞 移植 CD4+CD25+T细胞 系统性红斑狼疮 　　ABSTRACT: Objective To study changes of the peripheral blood CD4+CD25+T cells in patients ic lupus erythematosus after autologous peripheral blood purified stem cells transplantation. Methods Totally 15 patients ic lupus erythematosus cells transplantation etry easure CD4+CD25+T cells counting before transplantation and at 3, 6, 12, 24 months after transplantation. Results Before transplantation, the percentage of CD4+CD25+T cells onths after transplantation, the CD4+CD25+T cells counting increased markedly pared onths after transplantation. CD4+CD25+T cells of relapsed SLE arkedly lo cells transplantation can effectively increase the level of CD4+CD25+T cells in patients ic lupus erythematosus. 　　KEY ouse IgG2b/FITC、同型对照Mouse IgG2a/PE均购自深圳晶美有限公司。FACSCalibur 型流式细胞仪(美国Becton Dickinson公司)。 　　1.3 外周血的采集 分别于移植前、移植后3、6、12、24个月取患者肘前静脉。使用一次性采血针抽血，用5mL注射器抽2mL静脉血丢弃，将注射器从采血针上取下后，将采血针插入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，取1mL静脉血沿试管壁缓慢注入抗凝管，6h内送检。同法采健康对照组外周血。 　　1.4 流式细胞术检测CD4+CD25+T细胞的表达情况 标本分成两个流式管，分别作检测管和同型对照管。取EDTA抗凝的SLE患者外周血100μL，分别放入各流式管，检测管加入FITC标记的鼠抗人CD4单克隆抗体(IgG2b)及PE标记的鼠抗人CD25单克隆抗体(IgG2a)，同型对照管加入Mouse IgG2b/FITC及Mouse IgG2a/PE各10μL，轻轻混匀，室温避光20min后，加入红细胞裂解液2mL，振荡混匀后避光至10min，1000r/min离心5min，弃上清；加入磷酸盐缓冲液(PBS)悬浮细胞，以1000r/min离心5min，弃上清；再用PBS 1次，离心弃上清，加入0.3mL PBS悬浮细胞，室温避光10min后上机。使用光源为488nm的氩激光。上机前先用标准微球进行光路和流路的教正，使变异系数在2%以下。用同型对照确定荧光阴性范围，根据细胞的前向角散射光(FSC)和侧向角散射光(SSC)特性初步圈取淋巴细胞群门，每份标本中测定淋巴细胞群门中10000个淋巴细胞中CD4+CD25+T细胞的百分率。 　　1.5 统计学处理 组间CD4+CD25+T细胞表达水平的比较应用SPSS10.0统计软件进行重复测量数据的方差分析。移植前SLE患者组与对照组外周血CD4+CD25+T细胞的表达水平的比较进行配对t检验。复发与未复发组间采取单向方差分析。结果中所列数据以±s表示。以Plt;0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 移植前SLE患者外周血CD4+CD25+T细胞的表达水平 移植前SLE患者外周血CD4+CD25+T细胞的表达水平为(7.61±1.86)%，明显低于对照组(11.21±2.38)%，差异有统计学意义(t=8.025，Plt;0.01)。 　　2.2 移植前后不同时期SLE患者外周血CD4+CD25+T细胞的表达水平 CD4+CD25+T细胞在移植前后不同时间段均有不同程度的表达(图1)。移植前SLE患者外周血CD4+CD25+T细胞表达水平较低，移植后3个月开始增高，移植6、12、24月后恢复到较高水平。移植前后不同时间内CD4+CD25+T细胞表达水平的差异有统计学意义(F=19.502，Plt;0.01，表1)。 　　表1 移植前后不同时期SLE患者外周血CD4+CD25+T细胞的表