非CO2依赖型细胞培养系统对前列腺癌PC3细胞.docVIP

　　非CO2依赖型细胞培养系统对前列腺癌PC3细胞 【摘要】 目的 探讨非CO2依赖型细胞培养系统对前列腺癌PC3细胞增殖的影响。方法 对前列腺癌PC3细胞采取非CO2依赖型细胞培养系统及CO2依赖型细胞培养系统进行培养，均在37℃培养箱(大气环境)和37℃，50mL/L CO2培养箱条件下，检测分析两种体系pH的变化;采用细胞增殖曲线及克隆形成实验检测细胞生长差异情况;并使用RTPCR技术检测分析两种体系下的前列腺癌细胞中survivin、caspase3基因的表达差异。结果 两种培养系统条件下，细胞培养基pH变化趋势一致(Pgt;0.05);两种培养系统下PC3细胞生长增殖未见差异(Pgt;0.05);RTPCR法检测显示两种培养系统下表达survivin、caspase3未见差异(Pgt;0.05)。结论 前列腺癌非CO2依赖型细胞培养系统对细胞增殖、基因表达等方面与前列腺癌CO2依赖型细胞培养系统无显著差异。 【关键词】 PC3前列腺癌细胞;非CO2依赖;survivin;caspase3 　　Methods Prostate carcinoma cell line PC3 and CO2dependent culture cell system at 37℃ in 50mL/L carbon dioxide incubator and at 37℃ in air incubator. The pH of culture medium s ing assay. The expressions of survivin and caspase3 mRNA of cell culturing s s, the pH trend e (Pgt;0.05), PC3 cell proliferation and the expressions of survivin and caspase3 mRNA of the cell had no obvious differences (Pgt;0.05).Conclusion CO2independent culture cell system is parallel to CO2dependent culture cell system in their effects on cell proliferation and gene expression. 　　KEY EM培养液(GIBCO公司)，培养基配制按GIBCO公司说明书，非CO2依赖型细胞培养基的配制为DMEM培养液加入某些成分(专利申请中)后调至pH值约7.4。小牛血清(GIBCO公司)，RTPCR反应体系(Promega公司)。CCK8试剂(大连宝生物有限公司)，caspase3 mRNA及survivin mRNA引物由上海赛百盛生物技术有限责任公司合成。 　　1.2 实验分组 共分为4组，即：37℃培养箱、大气环境下CO2依赖型细胞培养(大气 A)组，37℃培养箱、大气环境下非CO2依赖型细胞培养组(大气B)，37℃(50mL/L，CO2)培养箱CO2依赖型细胞培养(CO2A)组，37℃ 　　(50mL/L，CO2)培养箱非CO2依赖型细胞培养(CO2B)组。 　　1.3 细胞培养 PC3细胞均用含100mL/L胎牛血清(FBS)、100u/mL青霉素、100mg/L链霉素的DMEM培养基，在37℃培养箱、大气环境下和37℃(50mL/L，CO2)培养箱中培养，实验用细胞为接种后24h的对数生长期细胞。 　　1.4 两种系统培养基pH值的测定 将两种系统培养基分别置于37℃培养箱、大气环境中和37℃(50mL/L，CO2)培养箱中培养，24h后开始测定pH值，连测7d并记录数值。 　　1.5 克隆形成后的计数 取对数生长期细胞用2.5mL/L胰蛋白酶消化，用CO2依赖型细胞培养基和非CO2依赖型细胞培养基配成单个细胞，以1500个/孔细胞接种于6孔培养板中，每孔体积2mL培养基。分别置于37℃培养箱、大气环境中和37℃、50mL/L CO2培养箱中进行培养2周。当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加纯甲醇5mL，固定15min。然后去固定液，加适量Giemsa/结晶紫应用染色液染10～30min，后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，在低倍显微镜下计数大于50个细胞的克隆数。 　　1.6 细胞增殖曲线的绘制 使用上述两种培养基在96孔板中接种1.5×103/孔的细胞，每孔体积200μL，连续培养7d。用MTS法绘制细胞生长曲线。每孔加入10μL CCK8液，分别在37℃培养箱、大气环境中