肿瘤特异性溶瘤腺病毒载体的构建及其在肿瘤细胞中特异性的表达.pdfVIP

第31卷第2期 南京师大学报(自然科学版) Vo1．3l No．2 2008年6月 JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY(Natural Science Edition) Jun．2008 肿瘤特异性溶瘤腺病毒载体的构建及其在肿瘤 细胞中特异性的表达 浦颖艳，方 琳，沈 权，孙丽君，胡小翠，王 艳，曹祥荣，苏长青 (南京师范大学生命科学学院，江苏省分子医学重点实验室，江苏南京210046) [摘要] 为构建一种由人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)调控的能够在肿瘤细胞中特异性增殖的新型肿瘤 基因治疗溶瘤腺病毒载体系统，利用基因重组技术将hTERTp插入5型腺病毒E1A基因上游，构建肿瘤特异性 增殖腺病毒AdSU，使其携带绿色荧光蛋白报告基因．同时构建增殖缺陷型腺病毒Ad—EGFP作为对照．通过 Western blot分析表明该特异性增殖腺病毒AdSU—EGFP在肿瘤细胞中特异性表达EIA．而通过荧光显微镜观察 两者增殖实验发现，AdSU—EGFP在正常成纤维细胞株BJ及原代子宫成纤维细胞中无增殖，在肝癌细胞株MH— CC和肺癌细胞株A549中，则可见病毒增殖并裂解细胞的现象．由此可认为成功构建了肿瘤基因治疗的特异性 溶瘤腺病毒载体系统AdSU，该系统能够在肿瘤细胞中特异性增殖并表达所携带的外源基因，这对肿瘤的定向基 因治疗有着重要意义． [关键词] 基因治疗，溶瘤腺病毒，肿瘤，端粒酶启动子 [中图分类号]R730．54 [文献标识码]A [文章编号]1001-4616(2008)02-0092-05 Construction of Tumor-specific Oncolytic Adenovirus Vector and its Primary Study on Selective Expression in Tumor Cells Pu Yingyan，Fang Lin，Shen Quan，Sun Lijun，Hu Xiaocui，Wang Yan， Cao Xiangrong，Su Changqing (School of Life Science，Nanjing Normal University，The Jiangsu Key Laboratory of Molecular and Medical Biotechnology，Nanjing 210046，China) Abstract：To develop a novel geue therapeutic oncolytic adenovirus in which the hTERT promoter was introduced and used to regulate adenoviral E1 A gene．A novel cancer—specific replication—competent adenovirus named AdSU was con． structed by employing the human telomerase reverse transcriptase(hTERT)promoter to drive the expression of adenovi— rus E1 A gene and by cloning the EGFP reporter gene into the adenovirus genome．The non—replicative adenovirus named Ad—EGFP was constructed as the control at the same time．The selective replicatio