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第 34卷 第 1期 延 边 大 学 农 学 学 报 Vo1．34NO．1 2012年 3月 JournalofAgriculturalScienceYanbianUniversity Mar．2012 VE对犬卵母细胞体外成熟的影响 刘希， 康锦丹， 李所， 金花子， 尹熙俊 (延边大学动物胚胎工程研究所 ，吉林 延吉 133002) 摘要 ：在基础培养液 中分别添加浓度为 0，50，100，200~／mol／I的VE，研究不 同浓度 VE对成熟情况的影响。 结果表 明，体外 培养 48h后 VE浓 度为 50gmoi／I组 GV期的 比率显著高 于 1。O和 200 mol／I组 (Po．05)；100b~mo[／I组GVBD期的比率显著低于其它组 (P0．05)；达到MI～MII期的比率各组之间差 异不显著 (P0．05)，但 100,／mol／L组 MI—MII期的 比率相对较高。体外培养 72h后，VE浓度为 200l／mol／I癌i的GV期的比率显著高于对照组和 100,／mol／I组 (Po．05)，与 50~／mol／L组之间差异不显著 (PO．05)；达到 GVBD和 MI—MII期的比率各组之间均差异不显著 (P0．05)。因此 ，VE对犬卵母细胞 的 核成熟没有明显促进作用 。 关键词 ：犬 ；卵母细胞 ；体外成熟；VE 中图分类号 ：$829．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—7999(2012)01—0016—05 犬是人类最早驯化 的家畜之一 ，是人类忠实的朋友 ，在研究人类疾病上发挥重要作用 。超过 370种犬具 有遗传性障碍疾病，类似的疾病也发生在人类身上 。目前，有 36种犬被列为濒临灭绝的危险名单。犬科动 物胚胎对于改进犬科珍贵物种及保护濒危犬种十分关键，因此辅助繁殖技术 (assistedreproductivetech— nique，ART)的研究变得非常重要口]。卵母细胞体外成熟 (Invitromaturation，IVM)是辅助繁殖技术的起 点。由于犬生殖生理特点与其它哺乳动物不同，许多研究人员尝试了多种培养体系，如添加血清、促性腺激 素 、类固醇激素 、牛血清白蛋白和输卵管组织共培养等 ]，但是犬卵母细胞体外成熟率仍然很低。其主要 原因：1)犬是非季节性单次发情动物，每年排卵 1次或间隔5～12个月排卵 1～2次 ，排卵时间不易掌握 ；2) 犬 的繁殖周期与其它动物不同，其血液 中孕酮浓度在排卵前数天开始增加 ，排卵时血液孕酮浓度已经很高， 排卵前卵巢出现黄体化 ；3)犬排卵时卵母细胞处于生发泡期 (GV)，随后卵母细胞在输卵管内完成减数分裂 成熟。目前对犬输卵管环境的了解比较匮乏，还没有找到适合犬卵母细胞体外成熟的培养体系。 VE又名生育酚，是动物体 内必须的微量物质 ，拥有相似生物活性化学结构相似的酚类化合物，其本身 易被氧化 。细胞 内VE是主要的脂溶性抗氧化剂，可 以清除动物细胞膜上 自由基 ，从而保护细胞的完整性 ， 延长细胞寿命 ，动物胚胎培养中VE的加入可提高胚胎的发育潜能 。但是关于犬卵母细胞体外成熟培 养液中添加 VE尚未见报道。 本试验以犬卵母细胞为研究对象 ，通过在体外成熟培养液中添加不同浓度的VE，评价 VE对犬卵母细 胞体外成熟的影响。 1 材料与方法 1．1 试剂 除了特殊说明外 ，实验药品购 自Sigma公司。 1．2 卵巢的来源 本试验犬卵巢取 自延吉市屠宰场。放人盛有 37℃含双抗 的生理盐水 中2h内运回实验室。 收稿 日期 ：2011—12一o5 基金项 目：农业部转基 因生物新品种培育重大专项 (2009ZX08006一O02B) 作者简介 ：刘希(1986～)，男，吉林吉林人 ，延边大学动物胚胎工程研究所 ，在读硕士 。尹熙俊为通讯作者 ， TelE—mail：Yinxj33@hotmail．msrl 18 延 边 大 学 农 学 学 报 第 34卷 1．6 统计学分析 试验数据使用 spss13