斑马鱼胚胎显微注射基因分析平台的建立.pdf

四川动物2012年 第31卷第 3期 SichuanJournalofZoology Vo1．31 No．3 2012 DOI：t0．3969／j。issn。1000—7083．2012．03．029 斑马鱼胚胎显微注射基因分析平台的建立 陶大 昌 ，陈惠娟 ，赵君，马用信 (四川大学华西医院医学遗传研究室，成都610041) 摘要：斑马鱼作为一种新的理想模式动物，已在发育生物学、环境毒理学和人类疾病及相关基因功能等研究中 得到广泛应用。本文就建立斑马鱼胚胎的显微注射基因分析平台进行了探究 ，并通过piwil2基因的抑制和过表达 实验验证了平台的可操作性 ，也对建立平台中所要注意的问题进行了讨论。 关键词 ：斑马鱼；显微注射；piwil2 中图分类号：Q959．468；Q95-33 文献标识码：A 文章编号：1000—7083(2012)03—0468—03 Platform fortheMicroinjectionandGeneticAnalysisofZebrafishEmbryos TAODa—chang，CHENHui-juan，ZHA0Jun，MAYong—xin (DepartmentofMedicalGenetics，WestChinaHospital，SichuanUniversity，Chengdu610041，China) Abstract：Zebrafish，anideal modelanimal，hasbeenwidelyusedin developmentalbiology，environmental toxicology andfunctionalanalysisofhumandisease—relatedgenes．Inthisstudy，webuihamieroinjeetionplatformofzebrafishembryos anddemonstratedtheworkabilityofthisplaftorm byknockdownandover-expressionofzebrafishpiwil2gene．Moreover，we alsodiscussedtheproblemsofplaftorm structuring． Keywords：zebrafish；microinjection；piwil2 斑马鱼 (zebrafish，Daniorerio)隶属鲤科短担尼 1 材料和方法 鱼属，原产于印度、孟加拉国，属小型热带鱼类，染色 体数为50，成体长 3—4am，个体体型纤细，对食物 1．1 材料 和水质要求不高，容易饲养。斑马鱼具有繁殖能力 斑马鱼均为AB品系，由国家斑马鱼模式动物 强，产卵周期短，产卵量多，卵直径大；胚胎在体外发 中心(上海)惠赠，Olympus解剖显微镜，显微注射器 育，胚胎发育速度快；早期胚胎完全透 明，可随时观 (EppendorfAG，22331Hamburg)，玻璃针，注射物 察发育过程；单倍体、雌核发育二倍体的制作和突变 (DNA或mRNA)。 体的获得均较容易；精子可以冷冻保存等特点，使其 1．2 方法——斑马鱼的生长繁殖 非常适合于胚胎学和发育遗传学的研究，是研究脊 1．2．1 生长条件 斑马鱼为热带鱼类，适宜生长水 椎动物器官发育和人类疾病的重要遗传学模型之一 温为24～30℃，最适宜的生长和繁殖温度为28．5cC (ThisseZon，2002)。也被用于研究 目的基因在 (MatthewTrevarrow，2002)，水的pH为 7—8。自 脊椎动物中的表达和功能，特别是在母体产生的因 来水即可满足要求，但仍需要曝气 1d才能使用(周