大规模转基因彩色棉花后代筛选方法研究.pdfVIP

大规模转基 因彩色棉花后代筛选方法研究 厚毅清 。李忠旺 。石有太 ，欧巧明 ，罗俊杰 ，陈玉梁 (甘肃省农业科学院生物技术研 究所，甘肃 兰州 730070) ResearchontheScreeningMethodofLarge-scaleTransgenicColoredCo ttonOffspring HOUYi。qing，LIZhong-wang，SHIYou-tai，OUQiao-ming，LUOJunkie，CHENYu-liang 摘要 ：为 了验证 田间卡那霉素筛选与PCR分子鉴定相结合作为大规模转基因棉花后代筛选方法的可靠性 和实用性，以该方法对转基 因棉花不同品种的T 至T。进行筛选研究。结果表明：不 同品种对卡那霉素抗 性表现有差异 ，在确定卡那霉素筛选最佳条件后 ，陇棉 2号经过 5．0g·I2卡那霉素叶片涂抹，0～3d观 察期；BC05经过 5．0g·L 卡那霉素叶片涂抹 ，0～4d观察期；陇绿棉 3号经过 3．0g·L-卡那霉素叶片 涂抹，O～5d观察期，可 以明显识别植株是否对卡那霉素有抗性。此法快速筛选 的820株 阳性植株 中， PCR分子鉴定有 14株呈假阳性，164株具备外源 目的基 因，卡那霉素筛选的准确率为20 。因此，田间卡 那霉素筛选是一种快速的棉花转基 因后代筛选方法，但可靠性不足，如结合 目的基 因PCR分子鉴定 ，则是 一 种大规模转基因棉花后代群体筛选的有效方法。 关键词 ：转基 因棉花 ；大规模筛选；PCR分子鉴定 中图分类号：$562．035．3 文献标志码 ：A 文章编号 ：1o00—632X(2012)04—0022—04 转基因植株的筛选鉴定是植物转基 因研究 的 花后代的筛选鉴定提供参考 。 重要环节。目前 ，转基因棉花筛选鉴定 的常用方法 为卡那霉素筛选法和 PCR分子检测法ll1J。针对 l材料与方法 不 同试验 目的，这两种方法相关报道的文献较多 ， 1．1材料 但都有较强的针对性，在实际转基因棉花育种过程 供试品种为绿色棉陇绿棉 3号 、白色棉陇棉 2 中，这两种方法的应用均存在弊端。卡那霉素筛选 号、棕色棉 BC05，均由甘肃省农科院作物所棉花研 法不能反映 目的基因的表达效果，其筛选结果缺乏 究室选育、提供，具有纤维品质优 良、产量稳定等突 可靠性 。PCR分子检测法对试验室要求严格 ，检测 出性状_l7]。 费用昂贵 ，检测周期长。此外 ，转基 因克隆研究 的 转基因鉴定的供试材料为：①通过花粉管通道 发展迅速 ，不断出现新 的抗虫基 因、抗旱基 因、抗病 法对陇绿棉 3号 、BC05导人抗虫基 因 GNA、抗旱 基因 j，通过外源 目的基 因表达 ，而进行生物测定 基因 OhABF2的 T1一T3；②WBK09 的筛选方法各不相同，过程复杂 ，筛选缓慢。特别 1979分别与陇绿棉 3号、BCO5、陇棉 2号杂交 F 是近年 ，随着大规模转基 因研究的相继开展 ，传统 (GNA、G矗ABF 的基因质粒、引物序列 由中国农科 的筛选方法 已无法满足大规模转基 因后代 的高效 院生物技术研究所提供；WBK09含 Bt抗 虫基 因， 筛选 ，尤其是在转基因杂交育种中，需要在开花前 材料和引物序列均 由中国农科 院生物技术研究所 得到准确筛选结果 ，以便育种操作 ，传统 的筛选方 提供 1979含 BADH 抗旱基因，材料和 法在效率上 尚略显不足。因此，探索一种快速，准 引物序列 由新疆农业大学农学 院提供)，花粉管导 确 、较为系统的筛选方法，进行大规模转基因棉花