饲料分析与检测实验：饲料中游离棉酚测定 免费.docVIP

实验八 饲料中游离棉酚测定 【学习目标】 掌握饲料原料棉籽饼、粕游离棉酚测定方法，并能测定棉籽饼、粕游离棉酚含量。 一、原理 棉籽饼粕中游离棉酚的含量与棉籽的棉酚含量和棉籽的制油工艺有关。中国农业科学院畜牧所（1984）报道了不同工艺制得的棉籽饼粕中游离棉酚的含量，有许多超出了国家饲料卫生标准。如螺旋压榨法为0.030%～0.162%，土榨法为0.014%～0.523%，直接浸提法为0.065%，预压浸出法为0.011%～0.151%。因此，必须严格检测棉籽饼粕中的游离棉酚含量，根据检测结果合理控制棉籽饼粕的用量，以保证配合饲料中游离棉酚含量在国家饲料卫生标准规定的范围内。 三、试剂和溶液 除特殊规定外，本测定所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 异丙醇(CH3)2CHOH，HG3-1167； 正己烷；冰乙酸(GB-676)； 苯胺(C6H5NH2，GB-691) 如果测定的空白试验吸收值超过0.022时，在苯胺中加入锌粉进行蒸馏，弃去开始和最后10.0%蒸馏部分，放入棕色玻璃瓶内贮存在0～4.0℃冰箱中，该试剂可稳定几个月； 3-氨基-1-丙醇(H2NCH2CH2OH)； 异丙醇—正己烷混合溶剂6：4(V/V)； 溶剂A 量取约500.0ml异丙醇-正己烷混合溶剂，与2.0ml3-氨基-1-丙醇、8.0ml冰乙酸和50.0ml水于1000.0ml的容量瓶中，再用异丙醇-正己烷混合溶剂定容至刻度。 四、仪器设备 分光光度计: 有10.0mm比色皿，可在440.0nm处测量吸光度； 振荡器: 振荡频率120～130次/min(往复)； 恒温水浴； 具塞三角烧瓶: 100.0ml、250.0ml； 容量瓶：25.0ml(棕色)； 刻度吸管：1.0、3.0、10.0ml； 移液管：10.0、50.0ml； 漏斗：直径50.0mm； 表玻璃：直径60.0mm。 五、操作方法 （一）测定步骤 1.采集具有代表性的棉籽粕（饼）样品，至少2.0kg，四分法分至250.0g，磨碎，过2.8mm孔筛，混匀，装入密闭容器，低温保存备用。 2.称取1.0—2.0g试样(精确到O.001g)，置于250.0ml具塞三角瓶中，加入20粒玻璃珠，用移液管准确加入50.0ml溶剂A，塞紧瓶塞，放入振荡器内振荡l.0h(l20次/min左右)。用干燥的定量滤纸过滤，过滤时在漏斗上加盖一表面皿以减少溶剂挥发，弃去最初几滴滤液，收集滤液于100.0ml具塞三角瓶中。 3.用移液管吸取等量双份滤液5.0—10.0ml(每份约含50.0～100.0mg的棉酚)，分别至两个25.0ml棕色容量瓶a和b中。 4.用异丙醇-正己烷混合溶剂稀释瓶a至刻度，摇匀，该溶液用作试样测定液的参比溶液。 5.用移液管吸取2份lO.0ml的溶剂A分别至两个25.0ml棕色容量瓶a0和b0中。 6.用异丙醇-正己烷混合溶剂补充瓶a0至刻度，摇匀，该溶液用作空白测定液的参比溶液。 7.加20.0ml苯胺于容量瓶b和b0中，在沸水浴上加热30.0min显色。 8.冷却至室温，并用异丙醇-正已烷混合溶剂定容，摇匀并静置1.0h。 9.用lO.0mm的比色皿，在波长440.0nm处，用分光光度计以a0为参比溶液测定空白测定液b0的吸光度，以a为参比溶液测定试样测定液b的吸光度，从试样测定液的吸光度值中减去空白测定液的吸光度值，得到校正的吸光度A。 （二）测定结果 1.计算公式： 式中：X—游离棉酚含量(mg/kg)； A—校正吸光度； m—试样的质量(g)； V—测定用滤液的体积(ml)； a—质量吸光系数，游离棉酚为62.5cm-1.g-1.L。 2.结果表示 每个试样取2～3个平行测定，以其算术平均值为结果。结果表示到20.0mg/kg。 3.重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果的差值： 在游离棉酚含量 500.0mg/kg时,不得超过平均值的15.0％；在500.0mg/kg 游离棉酚含量750.0mg/kg时，不得超过平均值的7.5％；在游离棉酚含量 750.0mg/kg时，不得超过平均值的5.0％。 六、测定方法评价 学习过程应熟悉实验试剂的配制；实验过程严谨；步骤清晰；操作方法中认真记录数据；计算结果误差小。