饲料分析与检测实验：饲料中沙门氏菌的测定 免费.docVIP

实验十三 饲料中沙门氏菌的测定 【学习目标】 了解饲料沙门氏菌检验的重要意义，掌握沙门氏菌检验的原理、检验方法，并能检验饲料沙门氏菌。 一、原理 根据沙门氏菌的生理特性，选择有利于沙门氏菌增值，而大多数细菌受到抑制生长的培养基，进行选择性的增菌、选择性的平板分离、以检出饲料中的沙门氏菌。 本标准采用国际标准ISO 6779-1981 饲料中沙门氏菌检验方法。本标准适应配合饲料（混合饲料）或动物性单一饲料中沙门氏菌检验。引用标准GB4781.1食品卫生微生物检验。 二、设备和材料 1.电子天平，精度0.1g，最大量称1000g； 2.显微镜，1500×； 3.培养箱，36.0℃±1℃，43.0℃±1℃； 4.冰箱，普通冰箱； 5.均质器，8000.0-10000.0r/min； 6.广口三角瓶500.0ml； 7.三角瓶，250.0ml； 8.水浴锅，45.0℃±1℃，55.0℃±1℃，77.0℃±1℃； 9.刻度吸管，1.0ml、5.0ml、10.0ml； 10.配养皿，皿底直径9.0cm； 11.电炉；1000.0W 12.接种棒，镍铬丝； 13.酒精灯； 14.试管，试管架； 15.载玻片； 16.研钵； 17.干燥箱，50.0-250.0℃±1℃； 18.温度计，100.0℃； 19.高压灭菌器，2.5kg/cm2； 三、培养基和试剂 1.缓冲蛋白胨水 蛋白胨10.0g，氯化钠（GB 1266）5.0g，磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O,GB 1263）9.0g,磷酸氢二钾（K2HPO4·12H2O,GB 1274）1.5g；蒸馏水1000.0ml, pH 7.0； 按上述成分配好后，校正pH值，分装于大瓶中，121.0℃高压灭菌20.0min，临用时分装于500.0ml三角瓶，每瓶分装225.0ml，或配好后校正pH值，分装于500.0ml瓶中，每瓶225.0ml，121.0℃高压灭菌20.0min后备用。 2.四硫磺酸钠煌绿增菌剂 （1）基础液 牛肉浸膏5.0g，氯化钠（GB 1266）3.0g，蛋白胨10.0g，碳酸钙45.0g，蒸馏水1000.0ml，pH 7.0；将各成分加入蒸馏水中，加热至约70.0℃溶解，校正pH值，121.0℃高压灭菌20.0min。 （2）硫代硫酸钠溶液 硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O GB 637）50.0g，蒸馏水100.0ml溶解； （3）碘溶液 碘（GB 675）20.0g，碘化钾（GB 1272）25.0g，加蒸馏水至100.0ml；将碘化钾充分溶解于少量蒸馏水中，加入碘片，振摇试剂瓶至碘片充分溶解，再加入蒸馏水至规定量，贮于棕色瓶，塞紧瓶塞备用。 （4）煌绿水溶液 煌绿 0.5g，蒸馏水100.0ml，放于暗处不少于1d，让其自然灭菌； （5）牛胆酸溶液 干燥牛胆盐10.0g，蒸馏水100.0ml，煮沸溶解，121.0℃高压灭菌20.0min； （6）完全培养基制备 基础液900.0ml，硫代硫酸钠溶液100.0ml，碘溶液20.0ml,煌绿水溶液2.0ml，牛胆酸溶液50.0ml。临用前按照上列顺序，以无菌操作，依此加入基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加另一种成分，分装于灭菌瓶中，每瓶100.0ml。 3.亚硒酸盐胱氨酸增菌剂 （1）基础液 蛋白胨5.0g，乳糖（HG 3-1000）4.0g，磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O,GB 1263）10.0g，亚硒酸钠10.0g，蒸馏水1000.0ml，pH值7.0；溶解前3种成分于蒸馏水，煮沸5.0min，冷却后，加入亚硒酸钠，校正pH值后，分装，每瓶1000.0ml； （2）L-胱氨酸溶液 L-胱氨酸0.1g，1.0mol/L氢氧化钠(GB 679)溶液15.0ml，在灭菌瓶中用灭菌水将上述成分稀释到100.0ml，毋须蒸汽灭菌。 （3）完全培养基制备 基础液1000.0ml，L-胱氨酸溶液10.0ml，pH值7.0；基础液冷却后，以无菌操作加入L-胱氨酸溶液，将培养基分装于适当容量的灭菌瓶中，每瓶100.0ml，培养基在配制当日使用。 4.酚红、煌绿琼脂 （1）基础液 牛肉浸膏5.0g，蛋白胨10.0g，酵母浸液粉末3.0g，磷酸氢二钠（Na2HPO4 GB 1263）1.0g，磷酸二氢钠（NaH2PO4，GB 1267）0.6g，琼脂12.0～18.0g，蒸馏水900.0ml，pH值7.0；将上述成分加水煮沸溶解，校正pH值，121.0℃高压灭菌20.0min； （2）糖、酚红溶液 乳糖（HG 3-1000）10.0g，蔗糖（HG 3-1001）10.0g，酚红(HG 3-959)0.09g，蒸馏水加至100.0ml；将上述成分加水溶解，在70.0℃水浴加热20.0min，冷却