荞麦蛋白酶抑制剂基因的克隆及序列分析.pdfVIP

葬赘蛋白酶抑制热基露翁克隆爱序剿努轿 虫害是怒害农佟嘞高产，优葳靛圭罄藏因之～，全{鏊赛每年霹建损失约上千伍荧元。 长期使用化学杀虫剂W造成生态破坏与环境污染，并使备娄害虫产生抗药性。由于生物杀 虫荆的生产成本彀裹、田阀不稳定性及抗虫避窄等缺点，强嚣还远采能普遍使用。避过常 规育种手段泉获得抗威作秘，不仅选育历程较长，而且往往缺乏瑗想的亲本资源。基丽工 程技术的发展为培育抗病虫作物品种提供了新的手段，从而开辟了植物抗病虫育种的新时 载。又{|、】霹毅透过基鞭工程手羧萼孥≯}添抗盔基因转入农佟麴，培弯寤羡虫颧熬释。嚣羲霉 inhibitor,PI)基因在抗虫基因工程中由于具有很多独特的性质丽占有重要的地位。 莽麦是蓼科植物，具有较强的抗逆性，荞蠹种子中的疆自质含蕨可选15％，富禽多种 必鬟羲基裴，具有缀嶷数营粪馀擅零药瘸赞值。嚣翦，美于莠麦蛋囊酶翔铡裁一级缝擒的 报邀已有十种左右，健是据应的基医序列报道较少，因此研究荞麦蛋岛酶撺制裁基因结构 及翼表达调控的机理对于理解它的生理功能及进～步的转基因研究是非常豢要的。 本文以我国特产的荞麦为材料，从其种子和予叶中提取RNA，以反转录产物cDNA作 为旗扳，采用基因竟隧和cDNA文痒筛选豹方法，完成了下露主樊的工作： 1．依据文献报道的甜养麦胰蛋白酶抑制剂的氯基酸序列及其它植物来源的蛋白酶抑制 chain reaction)等方法， 裁蓬强魏孩骜酸痔到毖参照设诗；l骢，瘦翅RT-PCR(polymerase 直接体外扩增该抑制翩的结构基因，褥到了部分基因的编码序列。包括含158bp和84bp 新攘寻懿氨蒺酸彦魏与已掇遴豹葬麦蛋鑫酶撺剿麓豹氦萋馥痔烈貔筒源蔑分鬟荛51％藕 100％，与己报道的其它植物鬣岛酶抑制剂的氨潦酸序列的同源性分别为57％和74％。 的3’端部分序列，获得了甜莽澎蛋白酶抑制剂基因的3’端，加之先前获得的部分结构基因 bpt塞含 痔列，总长必3SSbp一其孛，翻译嚣为{擎垮，缡羁6t令懿基数，≤}编羁嚣202 AT(700)。荞麦蛋白酶抑制荆基因的获得，填补了国内外该研究领域的一项空白。 为底物，用融获得的DNA为模扳．合成标记探针，进彳予eDNA文库筛选。以期获得莽麦 蛋囱酶翔割翔戆全长蒸露枣列，巍进一步舞震莽嶷蛋白酶拯裁剂基爨豹表达及转基因抗虫 研究奠定前期工作萋础。 莽麦蛋白酶抑制剂基因的克隆及序列分析 Insectisoneofthe causesforthe reduction total pest major crop worldwide．Everyyear,the economiclossresultedfrom amouRtsto thousandsofbillion croppest nearly dollars．Many adverseeffectssuchas andinsecticideresistanceare ecologicaldamage，environmentalpollution allthe ofconstantofchemicalinsecticides．Ontheother consequences using hand，natural toits andnalTow bio-insecticideshaven’t due gotgeneralapplicationhighcost，fieldinstability anti-ins