疏水作用色谱进展＊.pdf

文献综述 疏 水 作 用 色 谱 进 展* 练鸿振 茅 力* 南（京大学现代分析中心，210008） 疏水作用色谱是利用样品中各组分不同的疏水 流动相一般为无机盐溶液，如硫酸铵等，它们 性质来进行分离的方法，主要分离对象为蛋白质。 对蛋白质的生物活性没有影响5〔6。降低流动相 而蛋白质分子量一般较大，生物活性又不稳定，因 的离子强度，洗脱能力增强。流动相的起始离子强 此寻找快速、高效且不损伤蛋白质活性的分离方法 度对分离有明显的影响，离子强度大，容量因子也 就显得十分重要。 大，选择性好，峰形尖锐7。 六十年代初，人们即已注意到疏水物质可作为 三（）pH值 柱色谱填料用于分离生物大分子，1961年，Gillam 中性pH对保持蛋白质的活性有利，pH变化对 等人曾报道苯甲 乙氨乙基纤维素对核酸 t- 蛋白质的溶解度和活性都不利6〔。但当pH由4增 RNA）的分部纯化l。尽管当时没有给这种方法 大至9 10时，大多数蛋白质的疏水性会减弱，有 一个确切的名称，事实上用疏水填料分离生物大分 利于洗脱2〔，因此经典HIC普遍采用降低离子强 子特别是蛋白质的工作开始就被重视，这方面的报 度同时适当增大pH的办法来分离蛋白质。随着 道也逐年增多。?973年，瑞典科学家Hjerten正式命 HIC的发展，硅胶被广泛用作固定相基质，鉴于 名该方法为疏水作用色谱法 HydrophobiaIn- pH＞7时，硅基固定相会逐渐溶解而流失，现在几 teractionChromatography,HIC)2。 乎全部采用中性缓冲溶液。如磷酸盐体系，乙酸一 乙酸盐体系，来保持离子强度变化着的流动相的 HIC的基本原理和影响因素 pH不变。 在HIC中，固定相表面呈弱疏水性，流动相 （四）温度 为高离子强度盐溶液，在这样的两相条件下，蛋白 对大多数蛋白质来说，在一定范围内，温度升 质分子中疏水部分与弱疏水性固定相表面的作用力 高会增大保留值8〔，但同时易使蛋白质溶解度变 增大而被吸附。逐渐降低流动相的离子强度，蛋白 小。，生物活性降低6〔。一般HIC只要求在相对稳 质按其疏水性的大小被依次洗脱，疏水性小的先洗 定的室温下进行，而不必严格控制流动相和柱子的 脱，疏水性大的后洗脱。在洗脱过程中，高盐浓度 温度。 对大多数蛋白质的活性没有损害。根据HIC的分离 机理，影响HIC分离的主要因素有以下几点： 经典疏水作用色谱 H（I） 一（）固定相的疏水特性 七十年代初期，HIC建立在经典柱液相色谱 首先固定相要具有明显的疏水特性，对蛋白质 技术的水平上，当时所采用的固定相主要是软性凝 的作用不附带静电引力，范德华力和氢键等；另一 胶，颗粒大，刚性低，分离速度和效能都不理想， 方面其表面疏水基团的密度又必须适中3〔，一般 到七十年代中期，才开始出现半刚性的固定相。下 较反相高效液相色谱固定相低10 100倍，呈弱疏 面简单介绍两类在 HIC初级阶段最具代表性的固 水性，对蛋白质的吸附为中等强度，密度太高会对 定相。 蛋白质产生不可逆吸附4〔。 * 疚某忻赏跣虏淌谌惹橹傅迹卮酥滦弧 二（）流动相的离子强度 *南京医学院预防医学系。 andinsitucross-linkedontheglasscapillary parationofPAHisomersandhig thermostability. columns.T