临床常见镰刀菌的鉴别.pdfVIP

· 276· 中国真菌学杂志2008年 l0月 第 3卷 第5期 ChinJMvcol，October2008，Vol3．No．5 · 论 著 · 临床常见镰刀菌的鉴别 窦红涛 李若瑜 万哲 李然 孙旭光 i、定方 王端礼 (1．北京大学第一医院皮肤科，北京 100034；2．首都医科大学同仁眼科中心，北京 100005) 【摘要】 目的 从分子生物学角度寻找一种快速准确鉴定临床常见镰刀菌的方法。方法 将受试镰刀菌接种于 PDA培 养基，观察其菌落及镜下形态，在此基础上PCR扩增受试镰刀菌的rDNAITS并测其序列，在 GenBank核酸序列数据库进行 同源序列搜索及分析。选择限制性内切酶DralI和CM3I进行RFLP。设计了茄病镰刀菌的种特异性引物 Sol、Sol，初步 验证其特异性。结果 形态学鉴定结果显示，茄病镰刀菌所占比例最高，除2株串珠镰刀菌外，其余镰刀菌 ITS序列分析的 结果与形态学鉴定结果一致。茄病、层生和串珠镰刀菌的DraII、Cfrl3I酶切带形互不相同。用Sol、Sol扩增受试菌的rD— NAITS，只有茄病镰刀菌为阳性。结论 rDNAITS序列测定及其PCR—RFLP可用于初步鉴别几种临床常见镰刀菌，合适的 种特异性引物可以初步快速鉴定茄病镰刀菌。 【关键词】 镰刀菌；内转录间隔区(ITS)；序列测定；限制性片段长度多态性(RFLP)；种特异性引物 【中图分类号】 R379．9 【文献标识码】 A 【文章编号】 1673—3827(2008)05-0276-04 Identification ofclinicallyimportantFusarium spp． DOU Hong—tao ，LIRuo—yu ，WAN Zhe ，LIRan ，SUN Xu—guang ，BU Ding—fang ，WANG Duan—li (1．Dept．Dermatology，PekingUniversitytheFirstHospital，Beijing100034；2．BeijingTongrenEyeCenter，CapitalUniversityof MedicalScience，Bejiing100005，China) A【bstract】 ObjectiveTofindrapidandreliablemolecularmethodstoidentifymedicallyimportantFusariumspp．．Methods TheFusariM，n DP．testedwerecultured on PDA．TheirITSofrDNA wereamplified usingPCR andtheirPCR productswerese- quenced．BLASTandsequencesanalysiswereperformedthroughthenucleicacidbankoftheGenBank．EndouucleaseincludingDra IIandCfrl31wereselectedtoperform RFLPanalysis．Apairofspecies—specificprimers—SollandSol2ofF．solaniweredesignedand theirsDecificitvweretested．Results solaniwerethemostpredominantspeciesbased onmorphologicalcharacters．The se— quencesofITSanalysisresultswerecoincidentwiththeirmorphologiesexcepttwoF．moniliforme．TheRFLPpatternsof solani． F．moniliformeandF．prolratumdigestedbyDraIIandCfrl31weredifferentfromeachother．Thespecies—specificprimerscan onlyamplifyrDNA ofF．solani．Conclusions PCR—RFLPandsequencingofrDNA ITScanidentifysomeFusarium spp．．Appro— priatespecies—specificpri