1种利用SDS-PAGE检测过氧化物酶同工酶的分析方法.pdfVIP

安徽农业科学，Journal ofAnhui A ．Sci．2008，36(14)：5759—5760，5766 责任编辑 姜丽 责任校对 马君叶 1种利用SDS检测过氧化物酶同工酶的分析方法 廖海，杜祯，周嘉裕 ，宋良科，靳晓娥，黄丹娥(西南交通大学药学院，四川峨眉614202) 摘要 旧的1建立i种能够检测过氧化物酶同工酶的电泳方法。『方法1利用SDS分离蛋白质样品分辨率较高的优点，借助SDS— PAGE分离蛋白质样品，电泳完毕后，胶板厢Tdtonx一1o0处理，使过氧化物酶同工酶复性，以醋酸联苯胺染色。[结果1并I]用新建立的方 法发现，5种菖蒲属植物含有6条过氧化物酶同工酶带， 而利用传统的PAGE分析方法则只显示5条过氧化物酶同工酶带。与PAGE 同工酶检测方法比较，新建立的方法分离效果更好，酶带边界更清晰，是1种分辨率更高的检测方法。『结论1利用新建立的方法得到 的过氧化物同工酶电泳图谱可以为菖蒲的科学分类和鉴定提供新的生化指标。 关键词 SDS；过氧化物酶；同工酶；菖蒲 中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 05i7-6611(2008)14-05759—02 A Detecting Method for Analysis of Peroxidase Isoenzymes Using SDS AGE LIAO Hai et al fCollege ofPharmacy．Southwest Jiaotong University，Emei，Sichuan 614202) Abstract 『0biective] rhe research aimed to establish a detecting method for Peroxidase isoenzv，mes．『Method1 Peroxidase isoenzymes were isolated by SDS．SDS was removed by washing the gel in Triton X一100．and the peroxidase was stained with acetic acid and benzidine． 『Result]There were 5 isoenzyme bands by using PAGE isoenzyme method in5 species ofA coru$L．But there were 6 bands observed by using the new method．Compared with the common PAGE isoenzyme method，the better separating effect and cle~ler borderline of bands were 0bServed in the new method． [Conclusion]The electrophoresis pattern of SDSisoenzyme m ethod f=[)E detecting peioxidase could be regarded as peroxidase fingerprints for identification of various species ofA corus L． 一 _。 0 Key words SDS-}’AGE：Peroxldase；Isoenzyme；ACOr／／$L． 。 一 过氧化物酶(Per0xidase，POD)同工酶作为一种重要的 Braford方法凹，以牛血清白蛋白为标准oPOD活性测定采用 遗传标记被广泛应用于生物学研究的各个领域，POD同工 愈创木酚方法圈。 酶能够在很大程度上反映植物个体之间的遗传差异，是探 ． 1．2．3 PAGE同工酶电泳。参照文献『21，采用÷12％或6％分 测基因差异和遗传变异的一种重要手段[i-3]。POD同工酶作为 离胶，5％浓缩胶。样品缓冲液配方：1 in01／L Tris_HCl，DH值 遗传标记，可为农作物、药用植物与药材品种鉴定提供重要 6．8，50％甘油，0．05％溴酚蓝。5种菖蒲的POD提取液与样品 依据 。传统的POD同工酶检测方法是先用聚丙烯酰胺凝