Draxin在小鼠脊髓损伤修复过程中的表达变化和其表达位置的实验研究.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………4 研究论文Draxin在小鼠脊髓损伤修复过程中的表达变化及其表达 位置的实验研究……………………………………………．．8 前言…………………………………………………………………8日U吾…………………………………………………………………8 材料与方法…………………………………………………………8 结果………………………………………………………………．．15 附图………………………………………………………………．．17 附表………………………………………………………………．．23 讨{念………………………………………………………………．．24 参考文献…………………………………………………………．．28 综述轴突生长导向因子与脊髓损伤…………………………………32 致谢……………………………………………………………………．．45 个人简历………………………………………………………………，．46 中文摘要 Draxin在小鼠脊髓损伤修复过程中的表达变化及其表达位置的 实验研究 摘 要 目的： 成功建立脊髓背侧半横切模型，观察轴突生长导向因子draxin在脊 髓损伤不同时期的表达变化及其在损伤脊髓中的表达位置，为其在临床脊 髓损伤疾病中的应用提供实验依据。 方法： l动物及分组：2月龄体重约359小鼠100只，按背侧脊髓半横切方 式建立脊髓损伤模型，根据Reuter感觉功能评价方法，确定脊髓损伤背 侧半横切模型建立成功。脊髓损伤模型随机分为正常未损伤组、损伤1 天组、损伤2天组、损伤3天组、损伤4天组、损伤5天组、损伤6天组 和损伤7天组，各10只，分别用于RT—PCR和WesternBlot检测。其余损 伤小鼠模型分成损伤1天组、损伤2天组、损伤3天组、损伤5天组，各 5只，用于损伤后脊髓组织免疫组织化学抗draxin抗体染色观察，或用于 免疫组织化学抗draxin抗体、抗DCC抗体双染观察。 2 损伤3天组、损伤4天组、损伤5天组、损伤6天组和损伤7天组每组各 取5只，10％水合氯醛麻醉后冰上迅速取下损伤节段脊髓，去除椎骨，暴 用于PCR。 3蛋白提取及WesternBlot：正常未损伤组、损伤l天组、损伤2 天组、损伤3天组、损伤4天组、损伤5天组、损伤6天组和损伤7天组 每组各取5只，10％水合氯醛麻醉后冰上迅速取下损伤节段脊髓，去除椎 骨，暴露脊髓组织，普通PBS清洗后迅速转移至裂解液中，充分匀浆后于 液用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，其余部分上清液置于-80。C冰箱储存， 用于WesternBlot检测。 中文摘要 4组织制备及免疫组织化学染色观察：损伤1天组、损伤2天组、损 伤3天组、损伤5天组，每组各取5只。将小鼠麻醉并暴露心脏，将输液 针刺入左心室，同时用剪刀挑开右心耳，迅速生理盐水冲洗，至无血后， 用4％多聚甲醛进行灌注。取损伤节段脊髓组织，PBS清洗干净，冷4％多 聚甲醛固定2h，放入含30％蔗糖的PBG中充分沉降，取出组织OCT包埋， 一80℃保存，用于免疫组织化学染色。 结果： 1成年期小鼠脊髓损伤后不同时期draxinmRNA的表达变化 成年期小鼠draxinmRNA在无损伤正常脊髓、损伤后1天、损伤后2 天、损伤后3天、损伤后4天、损伤后5天、损伤后6天、损伤后7天的 脊髓组织中均有表达。随着时间的推移逐渐增高，损伤后第3天出现了一 个表达高峰，后又表达下降。IOD数值在不同的检测时段有显著的差异(P 有统计学意义。 2成年期小鼠脊髓损伤后不同时期draxin蛋白的表达变化 成年期小鼠draxin蛋白在无损伤正常脊髓、损伤后1天、损伤后2 天、损伤后3天、损伤后4天、损伤后5天、损伤后6天、损伤后7天的 脊髓组织中均有表达。随着时间的推移draxin蛋白的表达逐渐增高，并在 损伤后第3—5天出现了一个表达高峰，后其表达又有所下降。IOD数值