苹果遗传连锁图谱构建及抗早期落叶病的基因定位.pdfVIP

北方园艺2011(24)：145～149 ·生物技术· 苹果遗传连锁图谱构建及抗早期落叶病的基因定位 李 爽，张军科，党伟锋 (西北农林科技大学园艺学院，陕西杨凌712100) 摘要：以“秦冠”x“富士”F。群体的158个株系为试材，得到最佳SSR-PCR反应体系：在 1．8 20_uL总的反应体系中而qDNA聚合酶0．5U、引物0．1／,tool／L、M921mmol／L、模板DNA 浓度15 0．30 ng／／*L、dNTPsmmo|／L。利用SSR分子标记，采用JoinMap3．0软件构建“秦冠”x “富士”的遗传连锁图谱。结果表明：从340对SSR引物中筛选出49对具有多态性的引物，在群 体中共获得75个SSR标记，其中17个不符合孟德尔遗传规律，其余27个位点可定位到10个连 锁群上。对苹果杂交F，代早期落叶病进行抗性遗传分析，最后将抗早期落叶病基因定位到了遗 传连锁图谱中的第10个连锁群上。与已经发表的苹果遗传连锁框架图对比结果表明，抗早期落 叶病基因被定位在已发表图谱的第8连锁群上。 关键词：苹果；SSR；遗传图谱；体系优化；基因定位 中图分类号：Q SSR标记又称简单序列重复，是目前较为常用的 1材料与方法 分子标记之一，因为其操作比较简单、具有共显性、对 1．1试验材料 DNA质量要求较低、稳定性强等优点被广泛应用到苹 “秦冠”(母本)、“长富2号”(父本)及其杂交获得 果[1。4]、梨[5]、桃¨。11’】等果树的性状标记上。在SSR标 的F。代植株158个。 记中，检出各成分的浓度是PCR是否成功的关键。但 1．2试验方法 是由于国内外所用SSR标记检测方法不同，国外SSR 1．2．1SSR分析苹果总DNA的提取：基因组DNA 标记检测多采用片段荧光测序的方法来识别，对PCR 的提取采用CTAB法[1纠；SSR引物合成和筛选：利用 产物的要求很低，而国内多采用变性SDS-聚丙烯酰胺双亲筛选法对340对苹果SSR引物，引物名称和序列 凝胶电泳检测，对产物要求很高，直接使用国外方法导 致SSR标记体系获得的条带难以通过SDS-聚丙烯酰 海生工公司合成。引物按照能否在父母本上产生多态 胺凝胶电泳检测。 性条带进行筛选，多态性引物用于群体SSR标记；SSR 早期落叶病主要包括斑点落叶病和褐斑病2种， 体系优化：随机选择具有多态性的引物CH03h06用于 是我国苹果产区普遍发生且较为严重的一种病害，该 对SSR反应体系优化。在20弘L总的反应体系中， 病大流行时，造成大片果树中下部叶片脱落，严重影响 M92_浓度为2．0mmol／L、引物0．3tLmol／L、模板 DNA 30 DNA聚合酶1U、dNT、Ps 苹果树的正常生长、花芽形成、果实增大和翌年苹果的 ng／ptL、Taq 0．3 产量与品质∽j。该研究通过对SSR-PCR体系中各种 成分的浓度筛选，从而得到最佳的PCR反应体系，并 梯度试验时，其它成分浓度不变。扩增程序为：94℃预 变性5min；94℃变性45S，60℃退火30S，72℃延伸 且应用SSR标记构建苹果的遗传连锁图谱，并且试图