白腐菌液体培养产生漆酶的研究.pdfVIP

第16卷第 1期 纤 维 素 科 学 与 技 术 、，01．16 N0．1 2008年3月 Journal of Cellulose Science and Technology M 2008 文章编号：1004-8405(2008)01-0013-07 白腐菌液体培养产生漆酶的研究 莫佳琳 ， 付时雨h， 詹怀宇 ， 涂启梁 (1．华南理工大学 制浆造纸工程国家重点实验室，广东 广州 510640； 2．国家食糖产品质量监督检验中心，广西 南宁 530022) 摘 要：研究了碳源、氮源和综合因素对白腐菌 conchatus液体培养产漆酶和生 长情况的影响。碳源为葡萄糖，氮源为酒石酸铵时，菌株的产漆酶能力较强；麦麸 为碳源，酵母膏为氮源，对菌株的生长最为有利。通过正交实验确定了最佳培养基 组成为葡萄糖10 g／L，酒石酸铵5 g／L，大量元素为基础培养基的3倍，微量元素为 20 mL。葡萄糖是影响菌株生长的主要因素。 关键词：漆酶；液体培养：酶活；生物量 中图分类号：Q815 文献标识码：A 漆酶是一种含铜的多酚氧化酶，可氧化木素中的酚型单元形成苯氧自由基，从而导致木 素相关结构的降解。在适合的介体存在时，漆酶还可以催化氧化非酚型的木素结构。漆酶具 有广泛的底物作用范围，可催化多种酚类和芳香胺类化合物的氧化，降解多环芳烃【¨。因此 漆酶不仅在木素的生物降解和制浆造纸中有重要的应用前景，而且在生物修复、环境污染物 脱毒、催化合成等方面也具有潜在的应用价值【24】。由于真菌是自然界中漆酶的主要来源【5】， 因而关于真菌漆酶的研究受到人们越来越多的关注。 白腐菌是目前已知的自然界中最具有降解木素能力的一类真菌[61，主要通过分泌的漆 酶、木素过氧化物酶和锰过氧化物酶降解植物中的木素。贝壳状革耳菌Panus conchatus是 一 株具有较强木素降解能力的白腐菌，其降解木素的能力主要取决于漆酶活力的高低，所以 研究其漆酶的分泌和活力情况对木素的生物降解、生物制浆、漂白及环境保护均具有重要的 意义。 真菌漆酶的合成水平除了决定于产酶菌株自身的产酶能力外，还受外在环境条件，如碳 氮营养源、微量元素，诱导剂等多种因素的影响【 们，通过漆酶合成影响因素的研究，寻找 最适产酶条件，可以节约生产成本，最大程度提高漆酶生产效率。 本实验考察了贝壳状革耳菌 conchatus在液体培养条件下各种条件如碳源、氮源及综 合因素对菌株的产漆酶和生长规律的影响。 收稿日期：2007-04-08 }通讯作者 作者简介：莫佳琳 (1977~)，女，华南理工大学制浆造纸工程博士，工程师，研究方向：生物技术在制浆 造纸中的应用。 14 纤 维 素 科 学 与 技 术 第l6卷 1 材料与方法 1．1材料 贝壳状革耳菌P conchatus为本实验室保藏的菌种。 1．2 斜面培养基 麦芽汁琼脂斜面，琼脂含量为2％，麦芽汁为本实验室白行制备，糖度为lO。。 l-3 基础培养基 0．1 mol／L HAc-NaAc缓冲液，pH值为4．8。 葡萄糖10g／L，酒石酸铵1．6mmol／L。 大量元素：O．01 g／L CaC12，2 g／L KH2PO4，O．25 g／L MgSO4。 lO mL／L微量元素溶液。微量元素组成为 (mg／L)．FeSO4．7H20 7．5；MnSO4·H20 2．5； ZnSO47H20 2：COC12‘6H20 3；CuSO4‘5H20 6；Na2BO3 3。 浅层培养基：将50 mL基础培养基分装于300 mL锥形瓶中，115C灭菌lO～l5 min，备用。 1．4 漆酶活力测定 用等体积O 5 mmol／L 2,2．连氮．二(3．乙基苯并噻唑．6．磺酸)(ABTS)溶液和酶液反应， 测定反应前3 min内420 mli1处吸光值的增加，每分钟使l gmol ABTS转化所需的酶量为一 个活力单位 (IU)。