樱桃生物有机肥研制及生物效应.docVIP

　　樱桃生物有机肥研制及生物效应 1 前言 1.1樱桃发展现状 植物根际土壤中含有大量的微生物，其中根际细菌的含量较高。根际细菌可以划分为两类。一类对植物生长有负面作用，称为有害根际细菌（Deleterious Rhizobacteria,DRB ）；一类对植物生长具有促进作 用，被称为植物根际促生细菌（ PlantGrooting Rhizobacteria, PGPR）（Kloepper et al., 1978）。PGPR 通过一种或多种促生机制直接或间接地促进植物的生长（Gray et al., 2005; Kloepper et al., 1989），其促生机制主要包括：直接刺激植物；促进对养分的吸收；抑制各种植物病害；诱导系统抗性等。直接促生机制包括产生植物激素（Asghar et al., 2004; Belimov et al., 2005; Shenget al., 2006; Mayak et al., 2004）、挥发性物质（volatiles）以及 ACC 脱氨酶等（Adams etal., 1979; Dellamico, 1989），减少植物体内的乙烯含量，改善植物营养（例如促进一些难溶性磷、钾和微量元素的释放，以及非共生固氮等）（Mishara, 2009; Zakria, 2008; Jamas,2000; Ladha et al., 2005; Iniguez, 2004; Vessey, 2003; Kim, 1998; Rodriquez et al., 1999;Verma, 2001; Kuklinsky et al., 2004）。间接促生机制包括诱导植物产生系统抗性（inducedsystemic resistance, ISR）（Knoyster, 1999; Raupach, 1996）产抗菌蛋白、抗生素或铁载体等减轻病害，降解农药等生物外源性物质（Backman et al., 2008; pant, 2005;Krechel, 2002; Bais, 2004; Thrane, 2000）。植物根际促生细菌有着丰富的遗传多样性。已发现许多属种的 PGPR，如芽孢杆菌属（Bacillus）、短芽孢杆菌属（Brevibacillus）、假单胞菌属（Pseudomonas）、类芽孢杆菌属（Paenibacillus）、节杆菌属（Arthrobacter）、不动杆菌属（Aciobacter）、伯克霍尔德氏菌属（Burkholderia）、农杆菌属（Agrobacterium）、慢生根瘤菌属（Bradyrhizobium）、链霉菌属（Streptomyces）、根瘤菌属（Rhizobium）、沙雷氏菌属（Serratia）、弗兰克氏菌属（Frankia）、硫杆菌属（Thiobacillus）等。研究表明 PGPR 广泛存在于植物的根际，据统计，包括芽孢杆菌属和假单胞菌属在内的 20 多个菌属都具有防病促生的潜能（Taghavi et al., 2009）。 1.2微生物有机肥料载体 微生物有机肥料是由一种或数种有益活体微生物，特别是植物根际促生菌（PlantGrooting Rhizobacteria, PGPR ）接种到有机吸附载体中制成的，借助其代谢过程或代谢产物，达到促进植株生长的目的（Karakurt et al., 2011; Abbasi et al., 2011）。微生物有机肥料生产成本低，能显著提高农产品质量和减少化肥使用量，在农业生产中发挥着越来越重要的作用，具有良好的应用前景。保证微生物有机肥料中微生物的活性是制备微生物有机肥料的关键，载体的选用对微生物有机肥料质量有关键影响（李敏清等，2011；刘雯雯等，2008）。目前市场上的微生物有机肥料载体以草炭最为普遍，但草炭价格较高，全球草炭资源有限，短时间无法更新，所以其应用受到限制（刘方春等，2010）。因此，能否找到一种更为经济环保的载体，已经成为微生物有机肥料生产中的突出问题之一（Ben et al., 2007）。最初从维多利亚多管水母（Acquorea Victoria）中发现的水母发光蛋白的伴侣蛋白，编码一个含 238 个氨基酸，分子量为 26.8KD 的单体发光蛋白，GFP 的生色团有 65-67位氨基酸残基组成。天然蛋白质中由 Ser-Tyr-Gly 组成，经环化以及 Tyr 的氧化脱氢后形成咪唑环。生色基团在环化后 2-4 个小时内自催化形成，并且需折叠形成正确构象才可以吸收可见光并产生荧光。GFP 具有两个吸收峰：主吸收峰在近紫外区，为 395nm，次吸收峰在蓝光区，为 475nm；同时或单独激发都可以使其产生波长为 508nm 的绿光（Chalfie et al., 1994）。 2 材料与方法