反相高效液相色谱法测定消风散中欧前胡素含量.docVIP

反相高效液相色谱法测定消风散中欧前胡素含量[摘要]目的建立消风散中欧前胡素的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法测定含量。色谱柱:UltimateXBC18柱;流动相:甲醇-水(66:34);流速:1.0ml/min;检测波长:300nm。结果:欧前胡素在3.64～36.4μg/ml范围内与峰面积成良好的线性关系(r=0.9999);平均加样回收率为99.8%,RSD=1.14%(n=5)。结论本法灵敏、准确,重现性好,可作为消风散中欧前胡素的含量测定。 [关健词]RP-HPLC;消风散;欧前胡素;含量 消风散是经河南省食品药品监督管理局批准的中药复方医院制剂,由白芷、荆芥穗、防风、紫苏叶、葛根等药物组成,具有祛风解表的功效,其质量标准中没有含量测定。白芷为方中君药,欧前胡素是白芷中重要活性成分[1],我们参考文献[2-3]采用反相高效液相法对欧前胡素的含量进行了测定,具有分离度好、重现性好、灵敏度高的特点,可以有效的控制该制剂的含量。 1仪器与试药 岛津高效液相色谱系统:LC―10ADVP输液泵,SPD―10AVP紫外检测器,进样阀10μl定量环,CTO―10ASVP柱温箱。色谱柱:KromasilC18(Φ4.6mm×250mm,5μm)。工作站:CS―Light色谱工作站。Preser92SM―202A―DR电子分析天平。欧前胡素对照品(购于中国药品生物制品检定所,批号:100826-200511);消风散(平顶山市中医医院制剂室,批号20081217;甲醇为色谱纯;水为纯净水;其余试剂为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件KromasilC18(Φ4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇-水(66:34);SPD―10AVP紫外检测器;检测波长:300nm;进样量:10μl;流速:1.0ml/min柱温:30℃;欧前胡素与样品中的其他成分峰的分离度R2.0。 2.2溶液制备[2] 2.2.1对照品溶液的制备精密称取欧前胡素对照品9.1mg,置50ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备液(含欧前胡素182μg/ml);再精密量取贮备液3ml,置25ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成对照品溶液(含欧前胡素21.84μg/ml)。 2.2.2供试品溶液的制备取本品约1.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,称定重量,超声处理(功率300W,频率50kHz)45min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液。 2.2.3阴性对照溶液的制备按处方比例及工艺,制备缺少白芷的阴性样品,再按供试品溶液的制备方法制备不含欧前胡素的阴性对照溶液。 2.3线性关系考察精密量取上述对照品贮备液1,2,3,3,5ml,分别置50,50,50,25,25ml量瓶中,加甲醇稀释成5个等差浓度(3.64～36.4μg/ml),各取10μl重复进样(n=3),记录色谱图。以吸收峰面积Y为纵坐标,以欧前胡素进样量X为横坐标,绘制标准曲线,得线性回归方程Y=0.000714631X+1.1516,r=0.9999(n=5)结果表明欧前胡素在0.0364～0.3640μg范围内进样量与峰面积积分值之间线性关系良好。 2.4精密度试验取对照品溶液,重复进样5次,每次10μl,测定其峰面积,结果欧前胡素峰面积的RSD=0.31%(n=5),表明精密度良好。 2.5稳定性试验取同一批号供试品溶液,分别在0,3,6,9,12h连续进样5次,进样量10μl,测定峰面积,RSD=1.21%,表明供试品溶液在12h时间内稳定。 2.6重复性试验分别取同一批号供试品1.0g5份,分别照供试品溶液制备方法制备供试品溶液,在上述色谱条件测定含量,RSD=1.23%,结果表明重复性良好。 2.7干扰试验分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl,按上述色谱条件分别进行测定,欧前胡素与其他组分的分离度R2.0,阴性对照无干扰,见图1。 2.8回收率试验精密称取已知欧前胡素含量的样品(批5份,分别加入对照品储备液1.0ml,按供试品制备方法制备供试品溶液。并按上述色谱条件进行测定,计算平均回收率为99.8?,RSD=1.14?,说明该含量测定方法可行。 2.9样品含量测定取不同批号样品三批,照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,照上述色谱条件进样10μl,分别测定峰面积,按外标峰面积法计算欧前胡素含量,三批样品含量分别为0.092%、0.092%、0.089%。 3讨论 3.1中药制剂多为复