高效液相色谱法测定田七花叶颗粒中人参皂甙Rb1含量.docVIP

高效液相色谱法测定田七花叶颗粒中人参皂甙Rb1含量【摘 要】目的：建立田七花叶颗粒中人参皂甙Rb1的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(AgilentThermoODSC18柱)，4.6×250mm;流动相：乙腈―0.2%磷酸(32：68);检测波长：203nm;柱温：40℃;流速：1.0ml/min;结果：该方法不受处方中其他成分的干扰，人参皂甙Rb1在104μg/ml～1300μg/ml之间呈良好线性关系。(r=0.999990)，稳定性#65380;重复性良好。平均回收率97.0%，RSD为0.67%。结论：该方法操作方便，准确可靠。可用于测定田七花叶颗粒中人参皂甙Rb1的含量。 【关键词】：高效液相色谱法 田七花叶颗粒 人参皂甙Rb1 【中图分类号】R96;R446【文献标识码】B【文章编号】1007-8517(2008)4-0028-04 田七花叶颗粒收载于《部颁标准》中药成方制剂第二十册[1]，药物成方为三七叶茎花。属解热镇痛#65380;抗炎药。标准未收载[含量测定]项目。参考有关资料[2]，三七叶茎花中含有的主要化学成分是人参皂甙Rb1，人参皂甙Rg1，和三七皂甙R1。作者用高效液相色谱法对田七花叶颗粒中人参皂甙Rb1的含量进行测定，为有效评价田七花叶颗粒的质量提供了方法。 1 仪器及试药 1.仪器 LC―2010A HT高效液相色谱仪#65380;Class-Vp工作站#65380;UV―VIS检测器。UV-265FW紫外可见分光光度计。 1.试剂 人参皂苷Rb1：中国药品生物制品检定所提供，批号为110704-200319，供含量测定用;乙腈：进口色谱纯;磷酸：分析纯;水：乐百氏纯净水;供试样品：田七花叶颗粒14批次。分别是：云南永孜堂药业有限公司(10批次);云南老拨云堂药业#65380;云南植物药业#65380;云南铭鼎药业#65380;昆明中药厂各1批次。 2 方法与结果 2.色谱条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(Agilent Eclipse Thermo ODS C18柱)，4.6×250mm;流动相：乙腈―0.2%磷酸(32：68);检测波长为203nm;柱温：40℃。流速：1.0ml/min。在此条件下，人参皂苷Rb1与其他组分能达到良好分离。 2.提取溶剂选泽 根据人参皂苷Rb1的性质，选用乙醇作为提取溶剂。 2.3 提取方法#65380;时间的比较 提取方法比较了超声处理(功率250W，频率50kHz)20～40分钟及回流提取30分钟，结果表明超声处理30分钟已提取完全，故选用简便#65380;快捷的超声处理30分钟作为前处理方法。见表1。 2.4 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rb1对照品0.2600g，置50ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度(5.2mg/ml)，作为贮备液。取储备液1ml于10ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，为对照品溶液(0.52mg/ml)。 2.5 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物，研细(或粉细)过4号筛，混匀，取20g，精密称定，置具锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，摇散，摇匀，超声处理30分钟(每10分钟取出摇散一次)，放冷，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，水浴蒸至近干，加乙醇使溶解，并转移至5ml容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。 2.6 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 2.7 空白试验 取处方中除三七叶浸膏外辅料，按处方剂量及制法和工艺要求制备缺三七叶浸膏的空白样品，照含量测定项下供试品溶液的制备方法制成阴性对照样品溶液，同法进行测定，结果在与对照品人参皂苷Rb1相同的保留时间位置，无其他干扰峰出现，表明除三七叶浸膏外的其他药材对人参皂苷Rb1峰无干扰。图谱见图1。 2.8 人参皂苷Rb1最大吸收波长的确定 精密吸取上述对照品溶液3ml于50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度。用UV-265FW紫外可见分光光度计描画人参皂苷Rb1的紫外吸收图谱，可见人参皂苷Rb1在203nm波长处有一显著吸收峰，故我们选择203nm作为人参皂苷Rb1的检测波长，这也与有关文献上所收载报道的一致[2]。 2.9 线性关系与线性范围考察 精密吸取上述对照品贮备液2.0#65380;5.0#65380;10.0#65380;15.0#65380;20.0#65380;25.0#65380;50.0ml，分别置100ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀。各注入高效液相色谱仪10ul，按上述色谱条件测定峰面积;以峰面积值为纵坐标，以人参皂苷Rb1进样