慢性应激对大鼠葡萄糖耐量及胰岛素抵抗影响.doc

慢性应激对大鼠葡萄糖耐量及胰岛素抵抗影响[摘要] 目的：探讨慢性应激对大鼠葡萄糖耐量及胰岛素抵抗的影响。方法：将40只SD大鼠按体重随机分成应激组和对照组各20只。应激组通过8周的慢性复合应激刺激作为慢性应激动物模型，对照组在此期间正常饲养。在试验4、8周监测大鼠体重、旷场实验、24 h尿皮质醇，在实验8周采尾血检测葡萄糖耐量（酶氧化法）、空腹胰岛素（化学发光法），并计算胰岛素抵抗和B细胞功能。结果：慢性应激大鼠4、8周后体重下降显著（P0.05）。 1.2 实验方法 1.2.1 慢性中度应激方法 给予改良的慢性复合应激（表1），包括饮水冲突应激、限制应激、噪声、闪烁照明、拥挤应激、潮湿环境、倾斜应激。饮水冲突应激是设计在标准大鼠饲养笼，将电脑时控仪和实验组的饲养笼联结成电流环路，电压36 V，电流1 mA，随机设定电脑时控仪的程序，当大鼠饮水时因电路接通而会受到电击，不饮水则电路不通，不会有电击（每周1次，通电间隔时间随机设定，总时间不超过20 min/d）。限制应激是将大鼠限制在一狭小的容器中(自制一塑料瓶，直径9 cm，长22 cm，一端敞小口，一端为活动式的大口)，在此容器中，大鼠可以翻滚身体，但不能前后左右运动（每周2次，每次2 h）。噪声和闪烁照明刺激仪（北京纽森特瑞科技有限公司）连接有电脑时控仪，可分别随机设定噪声和闪烁照明的刺激时间，噪声强度为80分贝（每周2次，每次4 h，间隔时间随机设定），闪烁照明灯据离鼠笼上方10 cm，闪烁频率为3次/s ，（每周2次，一次6 h，一次4 h，间隔时间随机设定）。拥挤应激是将10只大鼠放置于标准鼠笼中（每周2次，每次12 h）。潮湿环境应激是将300 ml水混合到垫料中（每周1次，每次16 h）。倾斜应激是将鼠笼倾斜45度角摆放（每周1次，每次16 h）。 1.2.2 糖耐量试验禁食12 h后，断尾取0 时血，测血糖，灌胃以50%葡萄糖，剂量为2 ml/kg，于灌胃后15、30、60、120 min分别断尾取血，采用利舒坦血糖仪（美国，Thera Sense公司）测各时间点血糖值绘制OGTT曲线，并计算血糖曲线下面积（AUCG），糖负荷后曲线下面积(AUCG )为OGTT曲线下各梯形面积之和，按梯形面积公式计算，血糖曲线下面积（AUCG） =1/2×（0 h血糖值+0.25 h血糖值）×0.25+1/2×（0.25血糖值+0.5 h血糖值）×0.25+1/2×（1 h血糖值+0.5 h血糖值）×0.5+1/2×（1 h血糖值+2 h血糖值）×1。 1.2.3 胰岛素释放试验禁食12 h后，内眦静脉取血，0时取血1.5 ml, 灌胃以50%葡萄糖，剂量为2 ml/kg于灌胃后30 min取血1.5 ml，立即4℃ 3 000 r离心15 min，取血清-20℃保存待查。血清胰岛素采用化学发光法，使用Berthold MPL2化学发光分析仪测定。胰岛B 细胞功能指数(HOMA-B)=20×空腹胰岛素/ (空腹血糖-3.5)，胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)=空腹胰岛素×空腹血糖/22.5。 1.3 统计学方法 应用SPSS13.0统计分析软件，数据采用t检验和方差分析，方差不齐的HOMA-B取对数后进行比较。 2 结果 2.1 慢性复合应激对大鼠体重、旷场实验的影响 实验开始前两组大鼠在体重、行为学方面没有显著性差异，4周后，与对照组比较，应激组大鼠体重、旷场实验差异显著，8周后，这种差异更加显著（表2）。 2.2 应激8周后，两组大鼠OGTT及AUC结果比较（x±s） 应激8周后，应激组大鼠OGTT曲线高峰前移至15 min出现血糖峰值，并且OGTT曲线下降缓慢，在0 min、30 min时两组血糖差异显著。应激组大鼠OGTT曲线下面积高于对照组，但没有显著性差异。 2.3 两组大鼠各指标均数的比较（x±SD） 与非应激组相比，应激组大鼠空腹胰岛素（P 1