电针刺对手术创伤大鼠脾T淋巴细胞内IL-2IFN-γ及ERK信号通路的影响.docVIP

中青年优秀论文评奖IL-2、IFN-γ及ERK信号通路的影响 哈尔滨医科大学附属肿瘤医院麻醉科 （黑龙江哈尔滨 150081） 王坤 王国年 针刺疗法是我国传统医学的瑰宝，许多证据表明电针 “足三里”和“阑尾”穴能明显改善创伤诱导的免疫抑制，但是这种作用的分子机制尚未十分明确。extracellular-regulated protein kinase1/2，ERK1/2）是丝裂原活化蛋白激酶mitogen-activated protein kinase，MAPK在细胞信号转导网络中处于枢纽地位，与辅助性T细胞分化有关。那么，电针是否可以通过ERK信号通路，促进IL-2、IFN-γ炎症因子mRNA表达和蛋白生成，进而提高脾脏T细胞免疫功能，目前尚不清楚。目的：观察电针“足三里”和“阑尾”穴对手术创伤大鼠脾脏T细胞内IL-2、IFN-γ和ERK信号转导通路的影响，探讨其保护作用的分子机制，旨在为临床探索术后免疫功能治疗提供新思路。方法：健康雄性SD大鼠32只随机分为：正常对照组（Control组, n=8）、单纯电针组（EA组, n=8）、创伤组（Trauma组, n=8）和创伤后电针组（T + EA组, n=8）。采用手术创伤致术后免疫抑制方法造模，大鼠术前12h 禁食、自由饮水，经腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg）麻醉后，分别沿大鼠背部中线、腹部中线作6cm和5cm的纵行切口，背部切口以暴露脊柱为度，腹部作纵行切口后，暴露腹部脏器3分钟，以检查有无病灶及损伤，然后关闭腹腔。选取双侧足阳明胃经上的“足三里”、“阑尾”穴进行电针，疏密波（60 Hz，1.05秒和2 Hz，2.85秒交替）强度以引起大鼠后肢肌肉轻微抖动而不嘶叫为宜（≤1 mA），持续30 min，每日1次，共3次。于术后3天无菌取脾，尼龙毛柱法分离脾脏T淋巴细胞，用酶联免疫吸附试验（ELISA）和逆转录聚合酶链反应RT-PCR）分别检测脾脏T淋巴细胞内IL-2、IFN-γ蛋白和mRNA表达；应用Western blot 检测ERK表达；ERK下游核转录因子NF-κB和AP-1表达测定，采用Trans-AM ELISA-based kits 分析法。结果：（1）EA组脾脏T淋巴细胞内IL-2、IFN-γ蛋白和mRNA表达，与Control组比较没有明显改变；手术创伤后IL-2和IFN-γ蛋白和mRNA表达明显降低，Trauma组与Control组比较有显著差异（P 0.001）；给予电针处理后IL-2、IFN-γ蛋白和mRNA表达，T + EA组与Trauma组比较有明显差异（P = 0.002）。（2）脾脏T淋巴细胞内total-ERK1/2及p-ERK1/2、 NF-κB和AP-1的DNA连接活性，EA组与Control组比较无明显差异；手术创伤后p-ERK1/2表达、 NF-κB和AP-1的DNA连接活性明显降低，Trauma组与Control组比较有明显差异P 0.001）；给予电针处理后p-ERK1/2表达、 NF-κB和AP-1的DNA连接活性，T + EA组与Trauma组比较有统计学差异（P 0.001）。结论：电针足三里”和“阑尾”可以提高创伤大鼠脾脏T细胞内IL-2、IFNγ蛋白和mRNA的表达，激活其免疫功能改善术后免疫抑制状态，这种保护作用与提高ERK1/2、 NF-κB 和 AP-1活性密切相关。这一发现对于理解电针免疫调节机制和临床应用具有重要意义。 关键词：电针；手术创伤；IL-2；IFN-γ；ERKAbstract BACKGROUND: the aim of our study was to investigate the effects of EA on the IL-2 and IFN-γ protein and mRNA expressions, as well as extracellular-regulated protein kinase (ERK) signaling pathway, and evaluate the signaling regulatory mechanism of EA effects. METHODS: 32 male SD rats were divided randomly into four groups (Control, EA, Trauma, and T + EA group, n=8/group). Rats were fasted overnight but allowed water ad libitum before the experiment. Directly prior to surgery, rats were anesthetized with an