体外冲击波联合rhIGF-Ⅰ对成骨细胞增殖及BMP-2表达影响.pdfVIP

山西医科大学硕士学位论文 体外冲击波联合rhIGF- Ⅰ对成骨细胞 增殖及BMP-2 表达的影响 摘 要 研究目的 探讨体外冲击波（extracorporal shockwave，ESW）和重组人胰岛素样生长因子 Ⅰ （recombinant human insulin-like growth factor- Ⅰ，rhIGF- Ⅰ）联合作用对成骨细 胞增殖及骨形态发生蛋白 2 （bone morphogenetic protein-2，BMP-2）表达的影响。 研究方法 6 体外培养人成骨肉瘤细胞株（MG63），制备细胞悬液（1×10 cells/ml），选择最佳 冲击波能量和最适 rhIGF- Ⅰ浓度。将制备的细胞悬液模型分为 A:ESW 组、B:IGF- Ⅰ组、C: 对照组、D:ESW 联合 rhIGF- Ⅰ组，B、D 组加入细胞因子 rhIGF- Ⅰ，A、D 组经最佳能量冲 击波干预，对照组不处理。以台盼兰染色评估冲击波干预后的细胞存活率；扫描电镜观察 冲击波作用后细胞膜形态结构变化；用 MTT 比色法检测检测冲击波干预后 4 小时、24 小时、 48 小时细胞的增殖和活力；收集各组细胞 24 小时、48 小时后的细胞培养上清液，用 ELISA 法测定细胞培养上清液中的 BMP-2 含量。 结果 5KV,1000 频次冲击波干预后，MG63 细胞存活率达 85%以上，且细胞表现出较高的增殖 活性，与其他能量组相比，差异具有统计学意义（p0.05）。ESW 作用于 MG63 细胞后引起 细胞膜发生疏松多孔性结构改变，细胞膜通透性增加，但细胞骨架结构并没有改变；MTT 检测结果显示：rhIGF- Ⅰ浓度为 100ng/ml 时，对 MG63 细胞的促增殖活性最大；ESW 和 rhIGF- Ⅰ（100ng/ml）分别单独作用于 MG63 细胞后均能促进细胞增殖和自分泌 BMP-2，两 组之间在促进细胞增殖方面差异无统计学意义（P=0.13），两组间 48 小时后 BMP-2 分泌 量差异具有统计学意义（p0.05）。ESW 和 rhIGF- Ⅰ联合作用能显著促进 MG63 细胞自分 泌 BMP-2，并持续到 48 小时后，但两者联合作用后在促进细胞增殖方面与 ESW 组和 IGF-1 组相比差异无统计学意义（p=0.16）。 结论 (1) 5kv，1000 频次冲击波干预下，ESW 的细胞毒效应最小，促进细胞增殖作用最强； (2) rhIGF- Ⅰ浓度为 100ng/ml 时促进细胞增殖作用最强； (3) ESW 作用于 MG63 细胞后引起细胞膜通透性增加，细胞骨架结构没有变化； (4) ESW 和 rhIGF- Ⅰ均能促进 MG63 细胞自分泌 BMP-2，两者联合作用对促进 MG63 细 胞分泌 BMP-2 具有协同作用，但联合应用后在促进细胞增殖上协同作用不明显。 关键词 体外冲击波；MG63 细胞；扫描电镜；rhIGF- Ⅰ；BMP-2；细胞增殖； I 山西医科大学硕士学位论文 The combined effects of extracorporeal shockwave and rhIGF- Ⅰon promoting proliferation and expression of BMP-2 of MG63 cells Abstract Qbjective To demonstrate the combined effects of extracorporeal shockwave (ESW)and recombinant human insulin-like gro