液相色谱仪(uv)检定操作规程.doc

1. 说明 1.1. 适用范围：适用于具可变波长紫外检测器的高效液相色谱仪的检定。 1.2. 参照依据：国家技术监督局JJG705-2002“实验室液相色谱仪检定规程”、相关仪器操作说明书及中国药典2005版二部附录VD制定。 1.3. 仪器操作及环境条件：应符合相应仪器的操作及维护规程(SOP)。 2. 检定项目和技术要求 2.1. 泵流量设定值误差应Ss≤±2%；流量稳定性误差应SR≤±2%。 2.2. 柱温箱温度设定值误差ΔTs应不超过±2.0℃；柱温箱温度稳定性应不超过1.0℃。 2.3. 波长示值误差应＜±2nm； 波长重复性应优于1nm。 2.4. 定性测量重复性误差(5次定量环进样)应RSD≤1.5%。 2.5. 定量测量重复性误差(5次定量环进样)应RSD≤1.5%。 2.6. 基线漂移应≤5×10-3(Au/h)，基线噪声应≤5×10-4Au。 2.7. 最小检测浓度应不超过4×10-8g/ml（萘的甲醇溶液）。 2.8. 梯度误差Gc应不超过±3%（无梯度装置不进行此项检定）。 3. 检定方法 3.1. 泵流量设定值误差Ss，流量稳定性误差SR的检定 3.1.1. 仪器与用具 分析天平 万分之一 秒表 精度0.01秒 容量瓶 50ml 3.1.2. 操作程序 3.1.2.1. 将泵、进样器、色谱柱和检测器连接好，以甲醇为流动相。 3.1.2.2. 按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先精密称定过重量的容量瓶收集流动相，同时用秒表记录，准确收集10～25分钟，再精密称定其重量。收集时间 应符合下表规定，每个设定值重复测定3次。 3.1.3. 结果计算 按下列公式计算SS和SR： Fm=（W2-W1）/（P.t） SS=（Fm-FS）/FS×100% SR=(Fmax-Fmin)/F×100% W2为容量瓶+流动相的重量(g) W1为容量瓶的重量 P为实验条件下的流动相密度(g/cm3) t为收集流动相的时间(min)P Fm流量实测值(ml/min) FS流量设定值 Fmin同一组测量中流量最小值 Fmax同一组测量中流量最大值 F为同一组测量中流量的算术平均值 3.1.4. 结果判断：SS和SR值应符合下表规定 流量设定值(ml/min) 0.5 1.0 1.5 测量次数 3 3 3 收集流动相时间(min) 25 15 10 允许误差 SS 3% 2% 2% SR 3% 2% 2% 3.1.5. 注意事项:收集时间应将“秒”换算为“分”代入公式计算。 3.2. 柱温箱温度设定值误差ΔTs、柱温箱温度稳定性Tc的检定 3.2.1. 操作步骤：将温度设为60℃，将一经过校正的温度计放入柱温箱内，每隔10min读取温度计显示温度与柱温箱显示温度一次，共读取7次，求出平均值。平均值与设定值之差为ΔTs，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性Tc。 3.2.2. 结果判断：柱温箱温度设定值误差ΔTs应不超过±2.0℃；柱温箱温度稳定性应不超过1.0℃。 3.3. 波长示值误差及波长重复性的检定 3.3.1. 方法 3.3.1.1. 方法一 制备60ug/ml基准重铬酸钾的0.005mol/l硫酸溶液，用一节空管代替色谱柱将进样器与检测器连通，以水做流动相，流量为0.5～1.0ml/min，采用步进进样法，即在235nm±5nm、257nm±5nm、313nm±5nm、350nm±5nm四个波段处，分别每2min改变1nm，用注射器注入5～10ul（或定量环）标准溶液，重复测量三次。记录色谱图。 3.3.1.2. 方法二 制备60ug/ml基准重铬酸钾的0.005mol/l硫酸溶液，按紫外分光光度法，用1cm石英比色皿分别在235nm±5nm、257nm±5nm、313nm±5nm、350nm±5nm四个波段处，以0.005mol/L硫酸为空白，测定各波长处60ug/ml基准重铬酸钾的0.005mol/l硫酸溶液的吸收度，各波长重复测量三次。 3.3.1.3. 方法三 对于仪器有波长准确度自检功能的,可利用其自检功能进行检查，重复测量三次。具体详见相关仪器操作说明书。 3.3.2. 结果计算： 最大（或最小）吸收点对应的波长与标准波长之差即为波长示值误差。 三次测量平均值与三次测量值中最大差值即为波长重复性误差。 3.3.3. 结果判断：波长示值误差应＜±2nm；波长重复性应优于1nm。 3.4. 基线漂移和基线噪声的检定 3.4.1. 色谱条件： 色谱柱：C18 流动相：甲醇 流速：1ml/min 波长：254nm 3.4.2. 操作步骤 将仪器各部份联接好，将灵敏度设置为最灵敏档，开机，以甲醇为流动相，待基线稳定后,记录基线 10min，