载脂蛋白A-Ⅰ模拟肽对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响.pdfVIP

中南大学学报 学版’ C 、 2o11，36(1) hIIp：／／xhy．ysm 。t r ． ， entSouthUniv(MedSci) … ’ ”“…‘ 。… … 51 载脂蛋 白A—I模拟肽对 RAW264．7巨噬细胞 胆固醇流出的影响 谢琼 ，赵 水平 (1．中南大学湘雅二医院心 内科 ，长沙 410011；2．湖南省人民医院心 内科，长沙 410005) [摘要] 目的：观察载脂蛋 白A—I(apoA—I)模拟肽 D一4F对 RAW264．7巨噬细胞胆 固醇流 出的影 响 ，并探讨其机制。方法 ：巨噬细胞种植于24孔板 ，用 1．85×l0Bq／孔 。H一胆 固醇和含50肛g／mL氧化 型低 密度脂蛋 白(OX—LDL)共 同孵育 24h后 ，给 予不 同浓度 的 D一4F(0～100Ixg／mL)干预 24h，收 集细 胞用液体 闪烁 计 数 法 检 测 胆 固醇 流 出。采 用酶 联 免疫 吸 附试 验 (ELISA)测 定 细胞 内环 磷 酸腺 苷 (cAMP)含 量 ，采用 实 时荧光 定量 PCR及 Western印迹检 测 三磷 酸腺 苷 结合 盒转 运体 A1(ABCA1)的 mRNA及 蛋 白表 达。结 果 ：D一4F呈 浓度依 赖 及 时间依 赖性 促进 巨噬 细胞 内胆 固醇 流 出，增 加 细胞 内 cAMP水平 ，上调 ABCA1mRNA和蛋 白表达。8．Br．cAMP显著增加 D．4F介导的胆 固醇流 出和 ABCA1表 达，而蛋 白激酶A(PKA)抑制剂 虽然对基础胆 固醇流 出及 ABCA1表达 几乎无作用，却可 以抑制 8一Br— cAMP对胆 固醇流 出和 ABCA1表 达的促 进作 用。结论 ：D一4F促 进 巨噬细胞胆 固醇流 出，cAMP释放 及 ABCA1表达 ，可能与激活cAMP—PKA—ABCAl通路有关。 [关键词] 载脂蛋 白A—I模拟肽 ； 胆 固醇流 出； 巨噬细胞 ； 三磷酸腺苷结合盒转运体 A1； 环磷酸腺苷 DOI：l0．3969／i．issn．1672—7347．20l1．01．O08 EffectofapolipoproteinA—Im imeticpeptideson cholesterolefflux in RAW 264．7 cells XIEQiong一．ZHAOShuiping (1．DepartmentofCardiology，SecondXiangyaHospital，CentralSouthUniversity，Changsha41O011； 2．Department。厂Cardiology，People’SHospitalo厂HunanProvince，Changsha410005，China) Abstract： Objective Todetemfinetheeffectandpossiblemechanism ofanapolipoprotein (apo)A—Imimeticpeptide，D一4F，oncholesteroleffluxinRAW264．7macrophages．Methods RAW264．7macrophageswereincubatedinthemedium containing8一bromocAMP (8一Br—cAMP， 0．5mmol／L)andOX—LDL (50Ixg／mL)for24h．ThenvariousconcentrationsofD一4F (0—100 I-Lg／mL)orH89 (20txmol／L，aproteinkinaseA inhibitor)wereaddedf0rthepurposeofinteffer— ence．TheintraceUularcyclicAMP (cAMP)level