巴戟天多糖含药血清对体外培养成骨细胞凋亡的保护作用观察.pdfVIP

中国骨伤2008年1月第21卷第1期 China J OrthopTrauma，Jan．2008，Vo1．21，No．I · 39· · 基 础 研 究 · 巴戟天多糖含药血清对体外培养成骨细胞凋亡的 保护作用观察 李楠 ，王和鸣 ，郭素华 ，林旭 ，郑良朴 ，王力 (1．福建中医学院骨伤系，福建 福州 350108；2．福建中医学院药学系；3．福建医科大学分子医学中心；4．福建中医学院 中西医结合研究院) 【摘要】目的：通过体外培养成骨细胞(osteoblast，OB)，观察巴戟天多糖对细胞凋亡的保护作用，探讨巴戟天促进 成骨细胞活性的机制。方法：取巴戟天多糖和巴戟天水提液制备含药血清，用含药血清进行细胞培养。取24 h内新生 SD大鼠头盖骨成骨细胞，取2代培养的成骨细胞，分为对照组(培养过程中仅加入大鼠血清)、诱导凋亡组(对照组中 加入全反式维甲酸)、巴戟天水提物组(诱导凋亡组中加入巴戟天水提物药物血清)、巴戟天多糖组(诱导凋亡组中加入 巴戟天多糖药物血清)，通过荧光显微镜观察，流式细胞术检测细胞凋亡，RT_PCR检测Bc1．2／Bax基因表达，对巴戟天 多糖在细胞凋亡过程中的作用进行评价。结果：诱导凋亡组 12 h诱导的OB出现凋亡，细胞核或细胞质内可见致密的 黄绿染色，染色质形成明亮的凝聚块，24 h单个凋亡细胞与周围的细胞分离，细胞皱缩呈圆形或卵圆形。细胞变小，胞 浆致密，细胞器相互靠近，染色质浓缩，形成不同形状和大小的块状。巴戟天水提物组、巴戟天多糖组凋亡率显著低于 诱导凋亡组(P0．01)，且巴戟天多糖组低于巴戟天水提物组(P0．05)。凋亡细胞Bcl一2 mRNA表达水平：对照组巴戟 天多糖组巴戟天水提物组诱导凋亡组。Bax mRNA表达水平：诱导凋亡组巴戟天水提物组对照组巴戟天多糖组 (P0，01)。Bcl-2／Bax：对照组巴戟天多糖组巴戟天水提物组诱导凋亡组(P0．01)。结论：巴戟天在一定程度上可抑 制全反式维甲酸诱导的成骨细胞凋亡，且巴戟天多糖的这种作用显著优于巴戟天水提物，说明巴戟天多糖是巴戟天抑 制成骨细胞凋亡的主要成分之一。 【关键词】巴戟天多糖；成骨细胞；细胞凋亡；Bcl-2；Bax Protection of apoptosis of osteoblast cultured in vitro by Morinda Root Polysaccharide LI Nan ，WANG He—ming， GUOSu-hua，LINXu，ZHENGLiang-pu，WANGLi． Department of Orthopaedics andTraumatology，喇 c0 ofTCM， Fuzhou 350108，Fuj／o~，China ABSTRACT Objective：To explore the protection on apoptosis and the mechanism of promoting the cytoactive of OS— teoblast by Mofinda Root Polysaccharide through the observations of the cultured osteoblast in vitro．Methods：Prepared blood senlm with Mofinda Root Polysaccharide and Mofinda Root aqueous extract and cultured Osteoblast in vitro wi山 it． The second generation osteoblasts in vitro were separated from the cranium of 24-hours newbom SD rat，which were divided into control group(adding only rat senlm during cultivation)，induction apoptosis group(adding trans-retinoic acid in con- trol group)，Morinda Root aqu