高效液相色谱法测定地稔中没食子酸含量.docVIP

高效液相色谱法测定地稔中没食子酸含量摘要 目的:测定地稔中没食子酸的含量。方法:采用高效液相色谱法,Diamonsil C??18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相甲醇-0.1%磷酸溶液(3∶97),检测波长273nm,流速为1.0ml#8226;min-1,柱温为室温。结果:在5μg#8226;ml-1～50μg#8226;ml-1范围内,没食子酸浓度(C)与其峰面积(A)呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为99.2%,RSD=0.93%(n=6)。结论:该法快速简单,稳定可靠,专属性强。 关键词 没食子酸 高效液相色谱法 含量测定 地稔 地稔Melastoma dodecandrum Lour为野牡丹科属植物的干燥全草,具有清热化湿、祛瘀止痛,收敛止血等攻效[1]。用于痛经、崩漏、带下、产后腹痛、便血、痢疾、水肿、肺痈、咽肿、牙痛、痈肿、疔疮、痔疮等[2-3]。化学成份主要有酚类、氨基酸、鞣质及糖类成份[4]。近年来对地稔药材中没食子酸含量的测定有所报道[5-6],我们以高效液相色谱法,采用独特、简便的前处理方法及色谱条件,测定地稔中没食子酸的含量,方法简便快速,精密度高,准确度好,专属性强。 1 仪器与试药 1.1 仪器:日本岛津LC-10AT型高效液相色谱仪,SPD-10A检测器。N2000色谱数据工作站(浙江大学智能信息工程研究所);TU-1901型紫外可见分光光度计(北京普析通用);SB2200型超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)。 1.2 试药:没食子酸对照品(批号0831-9501,供含量测定用,购自中国药品与生物制品检定所),经高效液相色谱峰面积归一法测定其含量为99.6%。地稔药材(亳州市永刚饮片厂,批20050701。甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯,水为超纯水。 2 方法与结果 2.1 色谱条件:色谱柱:Diaminsil C??18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸(3∶97);检测波长:273nm;流速为1.0ml#8226;min-1;柱温:室温;理论塔板数:按没食子酸峰计算应不低于3000;分离度:应不小于1.5。见图1。 2.2 对照品溶液的制备:精密称取没食子酸对照品适量,加甲醇制成含没食子酸30μg#8226;ml-1的溶液,即得。 2.3 供试品溶液的制备:取地稔药材约10g,粉碎,过二号筛,精密称取5.0g,置250ml具塞锥形瓶中,精密加水50ml,超声处理30min,放冷,滤过,精密吸取续滤液25ml,用稀盐酸调pH值至1,再用乙酸乙酯振摇提取5次,每次20ml,合并提取液,置水浴上蒸至近干,残渣用50%甲醇溶解,并转移至10ml量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。 2.4 线性关系考察:精密称取没食子酸对照品5.0mg,置100ml量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml至10ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,进样20μl。以浓度C为横坐标,峰面积A为纵坐标,得回归方程为A=33846.00×C+81.21,r=0.9999。表明没食子酸在5μg#8226;ml-1～50μg#8226;ml-1范围内具有良好的线性关系。 2.5 精密度试验:精密吸取没食子酸对照品溶液(30μg#8226;ml-1)20μl,重复进样测定5次,记录色谱,没食子酸峰面积的RSD值为0.28%。 2.6 稳定性试验:取同一供试品溶液20μl,分别于0、2、4、6、8、12h进样,记录色谱没食子酸峰面积的RSD值为0.32%,供试品溶液在室温下12h内稳定。 2.7 重复性试验:精密称取同一批地稔样品6份,按“供试品溶液的制备”项下所述方法,制备6份供试品溶液,分别进样20μl,记录色谱,计算,地稔中没食子酸的平均含量为0.4526mg#8226;g-1,RSD值为0.98%。 2.8 加样回收率试验:取已知含量(0.4526mg#8226;g-1)的地稔样品,分别精密加入一定量的没食子酸对照品溶液,按“供试品溶液的制备”项下操作,分别进样20μl,记录色谱,计算回收率。结果见表1。 2.9 样品测定:精密称取三批地稔样品各3份,按“供试品溶液的制备”项下所述方法,制备供试品溶液,分别吸取供试品溶液各20μl,进样,记录色谱,测定峰面积,计算含量。结果见表2。 3 讨论 3.1 检测波长的选择:称取没食子酸对照品约1.0mg