周期性张应变对不同年龄兔膝关节软骨细胞产生糖胺多糖影响.pdfVIP

学位论文独创性声明 本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究 成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文 内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本 人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所 做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果： 1、交回学校授予的学位证书； 2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报； 3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开 道歉。 4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。 论文作者签名： 学位论文版权使用授权书 本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家 有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科 大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印 或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或 成果时，署名单位仍然为山西医科大学。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名： 日期：——年——月——日 指导教师签名： 日期：——年——月——日 (本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用) 山西医科大学硕士学位论文 前言 关节软骨由少量的软骨细胞和大量的细胞外基质构成。软骨基质由软骨细胞分泌，并 对软骨细胞起着保护作用。软骨损伤导致的许多骨科疾病的发生发展与软骨基质的减少与 丧失密切相关【¨。而软骨细胞合成、分泌基质活动受到机械应力的调控，异常的应力刺激会 造成软骨细胞功能下降、失调，使基质合成减少，失去正常的更新替换，从而导致关节退变 的启动及发展【21。近年来相继建立了许多动物试验及细胞培养模型来研究机械刺激对软骨 结构、代谢及功能的影响。人们发现，不同类型和大小的力学刺激可对软骨细胞的形态pJ、 分化与代谢f4】等方面产生不同的影响。而适宜的应力载荷能够促进软骨细胞增殖和合成细 胞外基质p一。 我们知道不同年龄的同一类细胞在许多方面存在差异，仅在其力学特性方面， wiⅡi锄son研究发现n从胎牛到成年牛成熟过程中，牛关节软骨表面的限制性压缩模量增 加了约一倍。我们以往的研究发现，不同年龄的同一类关节软骨细胞在细胞骨架、粘弹性 等方面的力学特性存在明显差异【8～，而周期性张应变力对不同年龄兔关节软骨细胞产生 GAG的影响尚未见研究。 而且，由于体外培养的软骨细胞因培养条件、取材部位不同，以及所受作用力的形式 型力学加载系统，能够对软骨细胞施加更为拟真而且精确的力学刺激【12】，来观察不同年龄 兔关节软骨细胞对应力相应的差别。 我们希望通过对各发育阶段软骨细胞的力学生物学研究，初步认识软骨细胞生长、成 熟和衰老过程中的自然规律及相应变化，有助于了解不同发育阶段患者软骨疾病的发病及 修复特点，同时也为选取适宜的软骨组织工程种子细胞提供更多依据，从而为骨与软骨疾 病的预防与治疗提供更多的思路。 材料与方法 实验材料 基底加载系统(太原理工大学应用力学及生物医学实验室)，DMEM培养基 台式高速离心机(T(m．168)，Th锄。酶标仪(The咖o，USA)。 实验方法 1动物模型与分组： 各3只。 2取软骨细胞分离培养： 膝关节软骨细胞分离培养：每次取同一年龄组兔空气栓塞处死。无菌条件下取双侧膝 关节，在超净工作台内将膝关节打开，锐刀刮取膝关节表面软骨，切成约1mm3的碎片， 瓶内，加入原代软骨细胞培养液，台盼蓝排除法染色后使用细胞计数板在镜下观察细胞存 活率。 3细胞计数： 使用细胞计数板计数：依据下列公式计算每毫升DMEM中活细胞数：细胞总数-4大格 细胞总数／4×104x4。细胞活性率=4大格活