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超声波提取桑葚果渣黄酮工艺探究摘要：本文研究了超声波辅助提取的温度。时间和料液比对桑椹果渣总黄酮的提取的影响，经单因素以及正交试验，表明在使用甲醇：乙醇＝3：1的浓度为70％的混合醇作为提取液时，最佳的提取条件为提取时间60min、提取温度70℃、料液比1：35；各因素对提取率的影响为：温度料液比时间。 关键词：超声波；桑葚果渣；总黄酮 目前我国对桑椹资源的利用尚处于初级阶段，由于桑椹季节性强，成熟季节只在每年4～5月，且桑椹为柔软型聚合果，含水量达80％以上，皮薄易破，霉菌、害虫容易侵害繁殖，常温下1～2天即变色、变味、腐烂，非常不耐贮运和保鲜。桑椹榨汁后的果渣中含有丰富的黄酮类物质，大多数植物的有效成分存在于植物细胞中，在提取过程中，当细胞内的有效成分向提取介质扩散时，必须克服细胞壁及细胞间质的双重阻力。使细胞壁及其间质结构产生局部的疏松、膨胀、崩溃等变化，减小细胞壁及细胞间质等传质屏障对有效成分从细胞内向提取介质扩散的传质阻力，从传质角度促使有效成分的提取率提高。 超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道，表明其具有耗能低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、空化效应、搅拌作用等，可加速植物细胞中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间。因此，本文对超声波辅助提取桑椹果渣中黄酮类物质的方法进行了研究，选择出最佳的提取条件。 1　原料与方法 1.1　原料 采自崇明松外松桑果园的新鲜桑椹，经螺旋压扎后产生的果渣。－18℃保存备用。 1.2　仪器设备与试剂 紫外可见分光光度计(UV－2450) 日本岛津 电子天平(XS－205)瑞士梅特勒托利多 超声波发生器(CP750)SONIC Newtown 旋转蒸发器(Laborota 4000) 德国Heidolph 循环水式真空泵(SHZ D(Ⅲ))　巩义市予华仪器有限责任公司 电热恒温水浴锅(HWSl2)　上海一恒科学仪器有限公司 GL-20G-Ⅱ冷冻离心机上海安亭科学仪器厂 电热干燥箱(CSI01－2A) 重庆银河试验仪器有限公司 槲皮素标准物质(99.99％)sigma 无水乙醇(分析纯)上海国药集团化学试剂有限公司 甲醇(分析纯)上海国药集团化学试剂有限公司 1.3　原料预处理 将冷冻保藏的桑椹渣进行冻干，冻干后的果渣粉碎过30目筛保存备用。 1.4　超声提取桑椹总黄酮方法 称取一定量桑椹渣粉末于烧杯中，加入50mi醇溶液，在不同温度下进行超声提取。提取液以3000rpm离心10rain，取上清液，用醇溶液定容至25mL。 1.5　标准曲线的制作 以0～40ug／mL槲皮素为标样，绘制标准曲线，得回归方程：y-0.0519x－0.000009，R2＝0.9999。 1.6　总黄酮的测定 分光光度法测定桑椹果渣中总黄酮的含量。 1.7　试验设计 选取醇溶液浓度、超声时间、超声温度进行单因素试验，在单因素试验基础上，采用正交优化桑椹果渣的超声提取工艺参数。 1.8　工艺流程 桑椹果渣→冻干→粉碎、过筛→称取→定量果渣→加入→定量醇液→超声提取→3000rpm离心,10min→上清液60℃下旋转蒸发→定容至50mL→测定。 2　结果与分析 2.1　超声提取桑椹果渣总黄酮的单因素实验 将预处理过的桑椹果渣置于烧杯中，加入一定浓度的醇溶液，超声浸提。提取完毕后离心取上清液。确定超声时间、超声温度、料液比的试验因素，分别研究各提取条件对桑椹渣总黄酮取率的影响。 2.1.1　不同提取试剂对桑椹渣总黄酮提取率的影响 在T=60℃的条件下超声提取60min，考察甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮四种不同提取试剂对提取率的影响以确定实验所采用的提取试剂。如图1所示，在本实验的条件下，甲醇的提取效率是最好的，但是由于甲醇具有一定的毒性，因此我们选用相对较安全的乙醇与甲醇的混合试剂作为超声提取桑椹果渣中总黄酮的提取试剂。 2.1.2　不同甲醇与乙醇的混合比例对桑椹渣总黄酮提取率的影响 在T＝60℃的条件下超声提取60min，考察甲醇和乙醇在混合比例为1：7、2：6、3：5、4：4、5：3、6：2、7：1这7种不同混合比例下对提取率的影响以确定实验所采用的提取试剂。如图2所示，甲醇所占混合试剂中的比例越高，桑椹果渣中总黄酮的提取效率越好。当甲醇和乙醇的比例3：1时提取率与甲醇和乙醇的比例为7：1差别并不明显，由于甲醇具有一定的毒性，因此本实验选用甲醇比例相对较少的甲醇与乙醇的混