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EV71 感染树突状细胞MAPK 信号通路分子差异表达研究 中文摘要 EV71 感染树突状细胞MAPK 信号通路分子 差异表达研究 中文摘要 目的：筛选树突状细胞（DCs ）感染肠道病毒 71 型（EV71 ）前后丝裂原活化蛋 白激酶（MAPK ）信号通路分子基因差异表达，阐明MAPK 信号通路在EV71 感染中 的作用及效应机制，为预防和治疗EV71 感染提供新的策略。 方法：(1)密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，贴壁2 小时后去除悬浮细胞， 加入含10%胎牛血清（FBS ）的RPMI1640 培养基、重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺 激因子（GM-CSF ）、重组人白细胞介素-4(IL-4) 的培养液诱导培养6 天，流式细胞仪 检测其表型，获得未成熟 DCs ；随后用EV71 感染未成熟 DCs，并检测感染后DCs 表型。（2 ）采用 qRT-PCR 方法分别检测 EV71 感染前和感染 2h 及 8h 后 DCs 中 MEK/ERK 信号通路相关基因表达情况。（3 ）Western Blot 检测MEK/ERK 信号通路 关键蛋白的磷酸化水平及EV71/VP1 的表达量。 结果：（1）流式细胞技术检测培养第6 天DCs 表型，CD11c，HLA-DR 表达率高达 90% 以上，CD80、CD86 达60% 以上，CD83 表达率为19.9%，淋巴细胞型CD3 低表 达，是未成熟DCs 的标志。EV71 感染后DCs CD11c 、HLA-DR 依旧高表达，CD83、 CD86 表达较未感染DCs 表达率高。（2 ）RT-PCR 结果显示EV71 感染DCs 后IκB-α、 IKKβ、IL-1α、IL-12、JUN 、Fos 、NF-ΚB1 等基因表达明显上调；而MAP2K 、MAP2K 、 1 2 MAPK1 和MAPK3 的mRNA 表达量并未见明显变化。（3 ）Western Blot 实验结果显 示，ERK 信号通路相关蛋白MEK1/2 和核内转录因子c-Jun 在EV71 感染8h 后磷酸 化水平增高，ERK1/2 在2h 、8h 和20h 后分别呈现出增高、降低再增高的双相激活 趋势。NF-κB 蛋白磷酸化水平及EV71 VP1 蛋白表达量随感染时间延长而增加。 结论 EV71 感染DCs 后，可明显刺激DCs 的成熟并双相激活MEK/ERK 信号通 路，以上结果说明MEK/ERK 信号通路的激活与EV71 感染有一定的相关性。活化后 的 MAPK 能够参与细胞的增殖、凋亡、炎症反应等过程，可能为预防和治疗 EV71 感染提供新的思路。 I 中文摘要 EV71 感染树突状细胞MAPK 信号通路分子差异表达研究 关键词：肠道病毒71 型；树突状细胞； 丝裂原活化蛋白激酶；细胞因子 作 者：侯学伶 指导教师：史伟峰 II Differential gene expressions of MAPK signaling pathway molecules in DCs against enterovirus 71 infection Abstract Differential gene expressions of MAPK signaling pathway molecules in DCs against enterovirus 71 i