广州地区α-地中海贫血的新生儿筛查和高分辨率熔解曲线分析技术在非缺失型α-地中海贫血筛查中的应用.pdfVIP

缩略词表 英文缩写 英文全名 中文译名 CE capillary electrophoresis 毛细管电泳 Hb CS Hb Constant Spring 血红蛋白CS Hb QS Hb Quong Sze 血红蛋白QS HPLC high-performance liquid chromatography 高效液相色谱法 HRM high-resolution melting 高分辨率熔解曲线分析 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链反应 gap- PCR gap-polymerase chain reaction 跨跃断裂位点聚合酶链反应 RDB reverse dot blotting 反向斑点杂交 SNP single nucleotide polymorphism 单核苷酸多态性位点 IEF isoelectric focusing 等电聚焦 DHPLC denaturing high-performance liquid chromatography 变性高效液相色谱法 OFT osmotic fragility test 渗透脆性试验 广州地区α-地中海贫血的新生儿筛查及高分辨率熔解曲线 分析技术在非缺失型α-地中海贫血筛查中的应用 研究生：唐海深 导 师：李东至 教授 专 业：妇产科学 中文摘要 α-地中海贫血(α-thalassemia ，α-地贫)是α-珠蛋白基因缺失或突变使α-珠蛋白 链的合成受到抑制而引起的遗传性溶血性贫血，是人类最常见且危害最大的单基 因遗传病之一，在我国主要集中在南方地区，广州是α-地贫的高发区。正常人有4 个α 基因，若4 个α-基因都缺失(Hb Bart’s 水肿胎) ，胎儿一般在妊娠晚期或出生 后数小时死亡。另外，一些非缺失型Hb H 病和非缺失型α-地贫纯合子患者贫血严 重，甚至需要输血治疗。静止型和轻型 α-地贫基因携带者自身无临床表现，但可 能生育重型地贫的胎儿，因此，在 α-地贫高发区进行人群筛查尤为必要。已有研 究发现脐血中的Hb Bart’s 与α-地贫直接相关，本研究应用全自动毛细管电泳技术 (Sebia Capillarys 2)对脐血进行Hb Bart’s 定量，探讨其筛查α-地贫的效果。另外， 近年来兴起的一种遗传学分析方法——高分辨率熔解曲线技术(HRM 技术) ，用于 基因突变扫描、基因分型等具有简单、快速、低成本等优点，本研究探讨HRM 技 术用于筛查非缺失型α-地贫的可行性。 一、 目的 1. 调查广州地区α-地贫的基因携带率及基因型频率。 2. 探讨新生儿脐血Hb Bart’s 水平与α-地贫类型的关系。 3. 探讨高分辨率熔解曲线技术(HRM 技术)用于筛查非缺失型α-地贫的可行性，建 立一种快速、简便、廉价的非缺失型α-地贫分子筛查方法。 二、 方法 1. 收集2010 年5 月至2011 年7 月我院产科分娩的6525 例新生儿脐带血。 2. 应用全自动毛细管电泳技术对6 525 例新生儿脐血进行Hb Bart’s 定量。 3. 采用 gap-PCR 技术检测所有Hb Bart ’s 阳性样本和随机抽取的100 例Hb Bart’s 阴性样本α-地贫的3 种常见缺失(--SEA、-α3.7 、-α4.2) 。 4. 对gap- PCR 技术未检出异常，但Hb Bart’s% ≧2% 的样本，用一种快速可靠的 多重PCR 检测四种缺