播散性念珠菌病小鼠肾脏中p38MAPK及INF-γ的表达及相关性研究.pdfVIP

中文摘要 相关性研究 摘 要 8MAPK是MAPK(mitogen．activatedprotein 目的：p3 号传导通路超家族的亚类之一，激素、G蛋白偶联受体、以及渗透压在内 的许多因素均能激活p38MAPK信号通路，使它在炎症、细胞应激、凋亡、 生长等多种生理和病理过程中发挥重要的作用。近年来研究发现，MAPK 信号转导通路在天然免疫和特异性免疫应答中起着重要的调节作用。哥 反映机体细胞的免疫状态。白念珠菌是最常见的院内感染致病菌，研究表 明，当机体感染白念珠菌后，细胞免疫在机体抗白念珠菌感染中占主导地 尚未见报道。本研究通过建立播散性白念珠菌感染小鼠动物模型，采用免 的表达情况，同时对二者的表达情况进行相关性研究，探讨其在播散性念 珠菌病发病中可能的机制，为临床治疗播散性念珠茵病提供新的思路和方 法。 方法： l菌株白念珠菌，来自于河北医科大学第二医院皮肤性病科真菌室保存 菌种。 2播散性念珠菌病小鼠模型的建立 昆明小鼠90只，雌雄各半，购自河北医科大学动物饲养中心，在河 北医科大学第二医院实验中心普通环境下，给予全价配合饲料饲养。经适 应环境后，按体重随机分为A、 B、C三组，每组各30只。A组小鼠为 B组为环磷酰胺对照组：从第1天开始小鼠经腹腔经腹腔注射同等量环磷 酰胺，连续4天，于第5天再经腹腔注射生理盐水lml／只，共l天。C组 为空白对照组；从第l天开始小鼠经腹腔注入同等量生理盐水，连续5 中文摘要 天。于实验第6d、第9d、第20d分批断颈处死小鼠，观察腹腔脏器大体 情况。 3播散性念珠菌感染小鼠肾脏菌株的鉴定 无菌条件下取出小鼠肾脏，无菌生理盐水冲洗数次后，将小鼠一侧 1／2肾组织研磨后，接种于沙氏培养基上培养。 4组织病理学检查及免疫组化检测 另一部分肾组织用10％福尔马林溶液固定，做常规病理HE染色及 PAS染色观察小鼠肾脏组织病理变化及白念珠菌感染情况。采用免疫组织 的表达情况。 结果： 1播散性念珠菌感染小鼠模型的建立 实验过程中，小鼠由于免疫抑制剂环磷酰胺造成多脏器出血、水肿死 亡共lO只；由白念珠菌播散感染死亡共11只：不明原因死亡共15只。 最终，纳入实验小鼠共54只。A组小鼠从实验第4d开始，精神、食欲 差，毛发无光泽，活动差；实验第6d，经解剖后小鼠腹腔内部分脏器水 肿明显，肾脏可见少量白色脓点形成；实验第9d，经解剖后，肾脏可见 白色脓点生成；第20d，经解剖后，肾脏可见大量白色脓点生成，部分脏 器充血、坏死。B组小鼠从实验第4d开始，精神、食欲差，毛发无光泽， 活动差，在实验第6d，小鼠肾脏未见明显变化；实验第9d经解剖后，小 鼠肾脏水肿明显，体积增大，无白色脓点形成；实验第20d，经解剖后， 肾脏水肿，体积增大，无白色脓点形成。C组小鼠组精神、食欲无变化， 毛发光泽，活动好，在实验第6d、第9d、第20d经解剖后，小鼠肾脏均 呈正常表现。 2播散性念珠菌感染小鼠体内肾脏组织真菌培养及鉴定 实验组小鼠肾脏第6d、第9d、第20d在沙氏培养基上培养72小时， 均可见白色菌落生长，经厚膜孢子琼脂培养基及血清培养法鉴定为白念珠 菌。 3组织病理学检查 ． A组小鼠，实验第6d，镜下肾脏可见完整肾小球、肾小管结构，PAS 染色无紫红色菌丝和孢子；第9d，镜下肾小球、肾小管结构破坏，细胞 中文摘要 核固缩，PAS染色可见紫红色菌丝和孢子；第20d，肾小球、肾小管消失， 可见坏死形成，PAS染色可见大量紫红色菌丝和孢子；B组小鼠，实验第 6d，第9d及第20d，肾小球、肾小管结构均完整，部分细胞变性，胞浆 均质红染，胞核完整；C组小鼠镜下均呈正常表现。 4p38MAPK在蛋白水平表达情况 免疫组织化学检测小鼠肾脏组织中的p38MAPK主要在细胞胞浆中 表达，阳性细胞可见胞浆染成棕黄色；免疫组化染色结果显示，A、B、C OD值分别为 组均可见阳性细胞表达。A组：实验第6d、第9d、第20d