骨髓及脂肪间质干细胞神经向分化能力比较研究.pdfVIP

骨髓与脂肪间质干细胞神经向分化能力比较研究 硕士生姓名： 诸葛栋 指导教师： 梁战华 教授 指导小组： 刘 晶 教授 葛 丹 讲师 宋 琳 助教 专业名称： 神经病学 摘 要 目的：神经系统疾病如脊髓损伤、退行性病、多发硬化、运动神经 元病等，主要原因是神经细胞的坏死、功能的缺失。干细胞(stemcells) 是一类具有无限自我更新和多向分化潜能的细胞，在一定条件下，可分 化为神经元样细胞和神经胶质样细胞，有望作为神经系统疾病细胞移植 的种子细胞，但是干细胞种类繁多，据其发生学来源的不同可分为胚胎 stem stem cells， 干细胞(embryoniccells，ESCs)和成体干细胞(adult 的优点是取材相对方便，不存在伦理学问题。目前研究较多的成体干细 marrow stemcells， 胞主要是骨髓间充质干细胞(bone mcsenchymal BMSCs)，它取材方便，易于分离纯化，神经向分化能力的研究也比较多， Stem Cells，ADSCs)作为近年来新发现的种子细胞，神经向 Mesenchymal 分化能力的研究还相对较少，但它具有BMSCs所不具备的优点，如：获 取更为方便，对人体创伤小，很少受血液及免疫系统的影响等。本实验 旨在比较人类BMSCs与ADSCs的神经向分化能力，为干细胞移植治疗 神经系统疾病筛选理想种子细胞。 消化的方法获取ADSCs。通过表面抗原检测的方法进行鉴定。2)采用 多种生长因子联合诱导方案诱导ADSCs、BMSCs神经向分化，即先用浓 度为l0 h，再加入20 ng／ml的bFGF预诱导24 ng／ml的bFGF、20 ng／ml 的EGF、20 h、3d、7d、l0d、14 ng／ml的BDNF，分别于24 d时进行 氏小体表达，观察细胞形态变化。3)统计阳性细胞的比率，卡方检验分 析统计结果。 结果：1．采用percoll密度梯度离心法成功分离出人骨髓间充质干细 06阳性，CD34阴性。2．通过对比 胞，细胞表型鉴定为CD90阳性，CDl ADSCs和BMSCs的生长曲线发现，脂肪间充质干细胞较骨髓间充质干 细胞具有更强的增殖能力。3．利用生长因子联合诱导的方式诱导BMSCs 变，胞体变圆并伸出细长突起，对于分化细胞的神经细胞特异标记的鉴 降，而NSE和Nissl小体诱导晚期才出现具有相似的阳性率。 具有与BMSCs类似的神经向分化能力。 marrow stemcells， 关键词：骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal BMSCs) tissue—derivedstem 脂肪间充质干细胞(adipose cells，ADSCs)成神经诱导 2 neuraldifferentiationof