骨髓源性神经干细胞制备的新技术和其临床应用的可行性研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 骨髓源性神经干细胞制备的新技术 及其临床应用可行性的研究 刖吾 干细胞研究为大量难治性神经系统疾病带来了福音。截至2010年10月18日， 在美国国立卫生研究院正式登记的干细胞治疗临床试验有3248项，其中基于成人 干细胞的治疗方案超过73种疾病，包括1400项FDA批准的临床试验，涉及神经 系统疾病包括但不限于：神经系统遗传性疾病、帕金森病、脑瘫、肌萎缩性侧索 硬化症和脊髓损伤。而且针对神经系统疾病的干细胞研究不仅限于此，但缺乏理 想的种子细胞阻碍了干细胞治疗的发展。探求一种高效、高质、安全的种子细胞 是当今干细胞用于治疗特定的神经系统疾病的热点、难点。 目前可用于移植治疗的干细胞主要包括胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细 胞因受伦理学争议和细胞安全性等影响，阻碍了其在临床治疗中的应用；而成体 stem 干细胞无论是神经干细胞(neuralcells，NSCs)、骨髓间充质干细胞(bone marrow stem tissue．derived mesenchymalcells，BMSCs)、脂肪源性干细胞(adipose stem CordBlood StemCells，UBSCs)， cells，ATSCs)、还是脐血源性干细胞(Umbilical 在体外均具有自我更新及多向分化的潜能，并表现相应的形态、表型和生物学特 征。因此成体干细胞及其衍生物移植或动员神经组织内的干细胞被认为是将来治 疗难治性神经系统疾病的有效方法。但NSCs在成人的脑细胞中仅占0．001％，且 细胞周围有大量的已分化细胞，具有取材不便，手术损伤较大和体外扩增时间长 等缺点；UBSCs取材于异体，存在免疫源性和传播疾病的可能；ATSCs和BMSCs 均具有自体取材、体外快速培养扩增、致瘤风险低、低免疫源性和免疫调节等特 点，但ATSCs取材和培养操作较复杂。因此，BMSCs及其衍生物有望成为临床 移植治疗难治性神经系统疾病的种子细胞。然而从初期的试验性治疗发展到成熟 的临床应用标准仍存在大量问题，其中包括：l、细胞来源和制备的安全性；2、 体内、外诱导生成的细胞是否真正的成神经分化为机体需要的具有特定功能的神 经细胞；成神经分化的比例；3、移植后机体内的迁移途径，以及与受体组织的整 合度。 本课题针对上诉问题提出：l、建立无异种异体蛋白的高效高质BMSCs分离 培养体系；2、采用尽可能接近人体神经细胞发育的内环境(脑脊液)，完成BMSCs 成神经分化，生成近似于天然形成的成体神经细胞；3、以大脑中动脉阻断的大鼠 derivedneural 为研究对象，观察移植脑脊液诱导的骨髓源性神经干细胞(BMSCs stem cells，BMSCoNs)改善大鼠行为学指标的情况，细胞体内的迁移途径，以及 与受体组织的整合度。 以期通过本课题的研究建立无异种异体蛋白成分的临床级移植干细胞制备的 培养体系；建立高效高质的BMSC-Ns制备的新技术，获得更为“原生态的细 胞；对获得的BMSC．Ns从生物学特性和移植治疗的有效性两方面进行鉴定，为 其应用于临床奠定基础。在获得医院伦理委员会批准的情况下，进一步完成脑脊 液诱导的BMSC-Ns临床治疗部分难治性中枢神经系统疾病的疗效观察。 试验包括：不同来源血清或血浆体外培养人骨髓间充质干细胞的研究：自体 脑脊液诱导入骨髓间充质干细胞定向分化为临床用神经样细胞的研究；脑脊液诱 导的骨髓源性神经干细胞治疗大鼠大脑中动脉缺血模型的实验研究；脑脊液诱导 的骨髓源性神经干细胞临床治疗部分难治性中枢神经系统疾病的疗效观察(附3 例报告)； 材料和方法 抽取健康志愿者骨髓60ml，分为3组，A组、B组以Percoll密度梯度离心法 结合贴壁法分离纯化人BMSCs，在培养过程中分别加入自体血清和胎牛血清作为 营养基质；C组以半骨髓法分离纯化人BMSCs，在培养过程中加入骨