骨髓树突状细胞诱导抗原特异性调节性T细胞的实验探究.pdfVIP

骨髓树突状细胞诱导抗原特异性调节性T细胞的实验研究 中文摘要 【目的】 marrow．derived 以小鼠骨髓源性树突状细胞(Bone DCs，BM．DCs)与异基 cells，Tregs)的产生。 【方法】 (1)成熟树突状细胞的诱导：从小鼠双侧股骨提取骨髓细胞，在GM．CSF 及IL．4协同刺激下培养，第7天收获半贴壁的骨髓未成熟树突状细胞(immatllre DCs，mDCs)。 异基因C57BL／6小鼠及同基因BALB／C小鼠不同成熟状态的DCs混合培养以诱 导Tregs的产生，5天后，以流式细胞仪检测各实验组诱导的Tregs(inducedTregs， iTregs)的CD25及FOXP3的表达。 (3)不同方法诱导产生的Tregs体外淋巴细胞增殖抑制试验：以BALB／C 入不同数量的同基因或异基因DCs诱导的BALB／C小鼠Tregs作为淋巴细胞增 殖抑制的效应细胞，以CFSE标记增殖反应细胞，-用流式细胞仪(FCM)检测 o晌埘ng陀gIllat0眄Tccns，nTregs)的增殖抑制效应比较。 【结果】 DCs，在光学显微镜下观察具有典型DCs形态的细胞比例在60．O％～90．O％， 表达阳性率较mDCs低，分别为(9．90±0．99)％和(40．27±2．50)％。 ±0．56)％和(9．65±0．92)％(PO．05)。 (3)不同方法诱导产生的iTregs体外淋巴细胞增殖抑制试验：抑制实验根 组不同来源的Tregs作为增殖抑制细胞分别与CD4+CD25‘增殖反应细胞以l：l、 (21．70±2．35)％、(28．20±2．55) ±1．12、60．67±1．53及(16．47±2．11)％、 ％。三组间两两比较，差异具有统计学意义(胙0．0I)。用CCK8法检测，上 ±0．32。三组间两两比较，差异具有统计学意义(pO．01)。 【结论】 (1)通过联合使用GM．CsF和IL．4，能从小鼠骨髓中诱导大量的imDCs， 经过LPS刺激，imDCs可以被进一步诱导成熟。 诱导的水平显著增高，可能因为CD4+T细胞对异、同基因抗原识别的差异所致。 (3)新鲜分离的nTregs在混合淋巴细胞反应抑制试验中显示一定的体外淋 巴细胞增殖抑制功能，异基因DCs诱导产生的Tregs对淋巴细胞的增殖抑制功 能比nnegs明显增强，同基因DCs诱导产生的Tregs对淋巴细胞的增殖抑制功 用异基因DCs能从CD4+T细胞中诱导产生具备 能比nTregS明显减弱。因此， 特异性抗原识别功能的抗原特异性TregS。 【关键词】 抗原特异性；调节性T细胞；树突状细胞 2 onInduction Bone study ofAntigen-specificlrregsby Exper主lnental DendriticCeHs Marrow．derived Abstract 【Objective】 Bonem跗0w·deriveddentriticcellswereco—culturedwith CD4+T allogeneic cells丘Dmmurine inan t0induce spleen anempt Antigen—speciflcTfegs． 【Methods】 ofmDCs：Bonema玎0wceIlswereisolated矗的mboth龟mufsof