人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1的表达的初步探究.pdfVIP

中文摘要 人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1 的表达的初步研究 II 人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1 的表达的初步研究 中文摘要 III 中文摘要 人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1 的表达的初步研究 人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因 Beclin-1 的表达的初步研究 中文摘要 背景：骨髓间充质干细胞具有自我更新和多向分化的潜能，但是经过长 期体外培养后，骨髓间充质干细胞增殖分化能力逐渐丧失，其机制仍不 明确。 目的： 1. 在实验室中分离培养人骨髓间充质干细胞，观察其生长。 2. 利用碱性成纤维细胞生长因子及上皮生长因子诱导人骨髓间充质干细 胞神经元样细胞分化，观察神经元样分化中细胞形态等一系列变化。 3. 初步检测人骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化过程中自噬相关基因 表达的变化，探讨该基因及其相关意义。 方法： 1. 在患者知情条件下抽取骨髓，以肝素抗凝，以Ficoll-Paque 密度梯度离 心法(无菌通风柜内操作)来获得人单个核细胞，倒置显微镜下进行细胞计 6 数后，以1.0×10 /L 的细胞浓度接种于6 孔板，72 h 换液1 次并去除未贴 壁细胞，直到贴壁细胞的融合率大于80%时传代培养，传代比例为1 ∶2 。 2. 传代培养至细胞状态稳定后，接种到预铺多聚赖氨酸的玻片上。等到 细胞融合率大于 50%时，采用碱性成纤维细胞生长因子开始预诱导神经 元样分化的进行。 3. 利用表皮生长因子诱导人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞，观 IV 人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1 的表达的初步研究 中文摘要 察其形态变化及生长情况。 4. 免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶等表达，采用Western blot 初步检测诱导前后人骨髓间充质干细胞自噬相关基因 Beclin-1 表达的变 化。 结果与结论： 1. 人骨髓间充质干细胞可以于体外培养存活一定时间，并可以于体外环 境中接受一定程度的预处理。 2. 经预诱导及诱导后，人骨髓间充质干细胞呈典型神经元样细胞分化， 神经元特异性烯醇化酶阳性率为78.7% 。 3. 诱导0.5 h 后处理组细胞中Beclin-1 的表达水平有所增加，但1 h 后开 始逐渐降低。说明体外可以诱导人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细 胞，自噬相关基因表达活性可能在诱导分化早期呈高表达，分化过程中 逐渐降低。 关键词：骨髓间充质干细胞；分化；神经元；自噬；Beclin-1 作 者：杨 翼 指导教师：董万利 V 人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1 的表达的初步研究 英文摘要 Autophagy-related gene Beclin-1 expression in neuron-like differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells Abstract BACKGROUND: