银杏叶活性成分的提取制备及测定方法的研究进展.docVIP

银杏叶活性成分的提取制备及测定方法的研究进展银杏叶提取物（GBE）具有独特的药理活性及巨大的临床应用价值，因此对银杏叶的药 用、保健等综合价值的深入挖掘和开发日益受到重视。本文就银杏叶的化学成分、提取分离 及其质量控制方面的最新进展作一综述。　　1　银杏叶的化学成分　　银杏叶的化学成分较为复杂，迄今为止，已从银杏叶中分离出大量的极性和非极性化合物，其中主要为黄酮类化合物、萜类内酯，此外还有有机酸、烷基酚和烷基酚酸、甾体化合物及 微量元素等。　　1.1　EGb761的化学组成　GBE具有多种生理活性，目前国际上标准银杏叶提取物是按德国Schwabe专利工艺生产的EGb761，其中黄酮含量为24%，萜内酯为6%，白果酸小于0.0005%，原花青素类7.0%，羧酸类成分13.0%，儿茶素类2.0%，非黄酮苷类20%，高分子化合物4.0%，无机物5.0%，水分溶剂3.0%，其他3.0%。提取物的各种成分是一个整体中有机的组成部分，EGb761的药理作用是各种相对固定组成的各组分共同作用的结果。　　1.2　化学成分的动态变化　目前比较公认的GBE的有效成分为黄酮类化合物和萜类内酯，而它们在叶中的含量随季节变化和植株性别差异会有较大变化。苑可武等［1］测定了北京地区银杏叶中黄酮含量的季节性变化，结果认为银杏叶总黄酮含量在4月份为最高，8月份时居次 ；同时发现大部分时期内以槲皮素为主而异鼠李素比例相对一直较小。南京大学药物研究所 对银杏叶中黄酮苷与萜类内酯含量分别进行研究［2，3］，结果发现黄酮苷含量以 5月份为最 高，以后逐月降低，雄性植株叶中黄酮含量明显高于雌性植株；而同株银杏树叶中萜类内酯 含量随季节变化规律与黄酮苷相异，同时发现雌性植株叶子中内酯含量明显高于雄性植株，分别为0.22%,0.09%。这一发现为我们充分利用自然资源提供了有价值的参考。　　比较各地测定的银杏叶总内酯及黄酮苷含量，结果相差较大，除各自测定的方法的准确度或系统误差外，银杏总内酯与黄酮苷是否与各地的土壤、气候、环境及银杏树的性别、树龄等 因素相关，还需做大量实验研究和分析统计工作。　　2　银杏叶提取物的制备　　2.1　有机溶剂提取法　这是国内外使用最为广泛的方法。由于银杏叶中含黄酮类化合物和内酯较少（分别为1.7%及0.6%左右），因此最终所得浸膏中此两类成分含量往往不高，所含杂质较多，离目前通行的“24+6”标准较远。为得到能用于制药原料的GBE，则必须将此浸膏进行进一步的分离纯化。常用的分离纯化方法有液-液萃取法、沉淀法和吸附洗脱法。胡敏等［4］探讨了溶剂萃取和树脂吸附精制银杏叶黄酮的机制，比较了两种方法，结果表明，树脂吸附精制法优于溶剂萃取精制法。　　树脂吸附纯化法近年来有较大的发展。陈冲等［5］将银杏叶以65%乙醇回流提取，减压浓缩，ZTC澄清剂沉降。其黄酮苷和内酯含量分别达到26%和6%以上。李新岗等［6］对吸附 银杏叶中银杏总内酯的树脂法进行研究，用50%乙醇沸提银杏叶干粗粉，滤液上724吸附树脂柱,最后得淡黄色粉末状提取物，含黄酮苷和银杏总内酯分别为27.4%，10.6%。该法操作简单，能耗低，投资少，安全可靠。树脂吸附生产工艺应用于银杏叶，其主要特点是成本低、回收率高、有机溶剂残留少。　　Teris等［7］对银杏内酯A，B，C与白果内酯的制备分离进行了研究。作者使用质量分数为6.5% NaOAc浸泡的硅胶柱，以中压液相色谱分离GA，GB，GC，GJ和BB的方法，先精制再分离，仅含1种内酯的色谱部位经重结晶3～4次可得纯品单体。　　2.2　超临界CO2提取法　近年来，随着国际上超临界流体提取技术的迅速发展，用该技术提取植物中的活性成分也越来越广泛。与有机溶剂法相比，具有提取效率高，无溶剂残留，活性成分和热不稳定成分不易被分解破坏等优点，通过控制温度和压力以及调节改性剂的种类和用量，还可以实现选择性萃取和分离纯化，欧洲已有专利报道采用SFE技术除去银杏叶粗提物中的杂质。近年来国 内学者［8］也开始探索和研究用该技术提取银杏叶黄酮类化合物，得黄绿色精提物 ，收率为4.1%，其中黄酮苷含量在35%以上。邓启焕等［9］以银杏叶有效成分分离为对象，建立了一套超临界流体小试、中试装置和实验方法，所得的提取物中银杏黄酮含量为 28%，银杏内酯含量为7.2%，均高于国际现行公认的质量标准。据夏开元等［10］报道，以乙醇和用大孔树脂提取的银杏叶精提物，于CO2-SFE精制前，毒性成分白果酸含量为2.0%，而用CO2-SFE精提后，白果酸含量降低到0.02%。Chen等［11］对SFE萃取银杏内酯和白果内酯进行研究，认为在萃取过程中必须有改性剂的参与。用超临界CO2提取银杏叶中的药用成分，已引起各国学者关注，成为新热点之一。