哈蟆油对D-半乳糖致衰老模型雌性大鼠实验探究.docVIP

哈蟆油对D-半乳糖致衰老模型雌性大鼠实验探究 　 作者：姚晖，姚锐， 原海晓， 王晓娟， 邓虹珠 【摘要】 　　目的观察哈蟆油(OR)对D-半乳糖所致雌性衰老模型大鼠血清和肝组织超氧化物歧化酶(SOD)及其分型铜锌-SOD（CuZn-SOD）、过氧化物酶(POD)、总抗氧化能力（T-AOC）等活性的影响。方法采用SPF级雌性SD大鼠40只，随机分为OR高、中、低剂量组和模型组，每组8只，D-半乳糖颈背部皮下注射6周。另设一组8只，同样部位每日注射生理盐水，作为正常对照组。第3周开始灌胃给药，模型对照组和正常对照组灌胃植物油。给药结束后收集标本，采用紫外分光光度法测定血清和肝组织总SOD，CuZn-SOD，POD，T-AOC的水平。结果模型组大鼠血清和肝组织总SOD、CuZn-SOD、POD和T-AOC活性明显降低，与其他各组比较有显著性差异（P＜0.01）。OR高剂量组比中、低剂量组能显著提高血清中上述指标数值（P＜0.05，P＜0.01）；OR中剂量比低剂量组能显著提高血清SOD，CuZn-SOD活性（P＜0.05）。OR高剂量组比低剂量组能显著提高肝组织中上述指标（P＜0.01）。结论OR明显提高老年雌性大鼠血清和肝组织SOD、CuZn-SOD，POD和T-AOC活性。OR能够增强衰老雌性大鼠抗氧化应激水平，从而改善其衰老程度。 【关键词】 哈蟆油； 抗衰老；超氧化物歧化酶；铜锌-SOD； 过氧化物酶； 总抗氧化能力 哈蟆油(Oviductus Ranae,OR)为蛙科动物中国林蛙Rana temporaria chensinensis David雌蛙的输卵管，经采制干燥而得,味甘、咸、平，归肺、肾经，具补肾益精、养阴润肺的功效，是一种扶正固本的药物，为我国特产的动物中药材［1,2］。哈蟆油能够显著延长果蝇的平均寿命和最高寿命，并且对老年大鼠具有抗氧化作用［3,4］。已证实，哈蟆油能降低D-半乳糖雌性衰老模型小鼠卵巢子宫中MDA含量，提高其SOD活力，增强生殖器官抗氧化作用，从而改善其萎缩和衰老程度［5］。以哈蟆油为主药的中药复方益妇宁可以提高血清雌二醇，通过多环节调节生殖内分泌功能，治疗更年期综合征及有关诸证疗效确切［6,7］。 本实验采用D-半乳糖所致雌性衰老大鼠作为实验对象，考察哈蟆油对氧化应激水平的影响，进一步探讨哈蟆油延缓雌性衰老的作用。 　　1 材料与仪器 　　1.1 动物SPF级健康SD雌性大鼠40只，体质量180～200 g，由南方医科大学实验动物中心提供，生产许可证号：2006A044。饲养室温度：20～25℃，相对湿度：40％～70％。实验动物中心使用许可证号：SCXK(粤)2006-0015。置动物于室温18～22℃，相对湿度65％，光照周期12 h∶12 h条件下饲养。自由饮水、进食普通饲料。鼠笼垫板与饮水瓶定时换洗，保持清洁。 　　1.2 药材和试剂哈蟆油细粉(南方医科大学中医药学院制剂教研室提供，批号：071210，100目)；D-半乳糖（国药集团化学试剂有限公司，批号；超氧化物歧化酶(SOD)及其分型CuZn-SOD、过氧化物酶(POD)，总抗氧化能力（T-AOC）试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供(批；食用植物油；冰醋酸为分析纯（广东光华化学厂有限公司，批号，其他试剂均为分析纯。 　　1.3 仪器岛津UV1700PharmaSpec（日本），FSH-2型可调高速匀浆器（江苏金坛市荣华仪器制造有限公司）；PL-303型电子天平（瑞典METTLER TOLEDO公司）；Sigma 3K30型低温高速离心机（Sigma公司）；L420台式低速自动平衡离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；DK-8AD型电子恒温水浴箱（上海一恒科技有限公司）。 　　2 方法 　　2.1 动物模型及分组取SD雌性大鼠随机分成5组，每组8只，分别为正常对照组，模型组，哈蟆油高、中、低剂量组。除正常对照组外的32只大鼠颈背部皮下注射D-半乳糖(350 mg／kg)，用生理盐水配制成14%溶液，用量按每次0.25 ml/100 g体质量计。正常对照组8只同样部位注射生理盐水，1次/d，连续6周。第3周开始，将32只模型大鼠随机分为4组，即OR高、中、低剂量组，模型组。按照“实验动物与人按体表面积等效量换算比率”可算出大鼠用药量：OR等效量为0.9 g／kg。OR高剂量为1.8 g/kg，中剂量组为0.9 g/kg，低剂量组为0.45 g／kg。OR以植物油配制。模型组和正常对照组灌胃植物油。 　　2.2 检测指标末次灌胃后腹主动脉采血，8 h内分离血清，-20℃保存。 　　2.2.1 肝上清液制备大鼠处死后，迅速剪开腹腔，剥离肝脏，称重后按1∶9(W∶V)加