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羟基积雪草苷对离体动脉条舒张作用及其机制 　 作者：白纪红 赵日红 吕秋军 马宪梅 【摘要】 目的探讨羟基积雪草苷（madecassoside，MC）的舒张血管作用及其机制。方法采用离体大鼠胸主动脉张力实验观察MC的舒张血管作用。结果MC使去甲肾上腺素（NE）和氯化钾（KCl）收缩动脉条的量效曲线右移，最大收缩力降低；并对NE诱导的细胞内Ca2+释放所引起的收缩有明显的抑制作用；但去除血管内皮细胞后MC反而使动脉条收缩进一步增强；在有一氧化氮合酶(NOS)抑制剂存在的情况下，其抑制NE收缩的效应消失；对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）收缩动脉条的量效曲线无明显影响。结论MC有明显的舒张血管作用，表现为钙拮抗活性，以抑制细胞内Ca2+释放为主；且通过内皮细胞发挥作用，并与一氧化氮（NO）合成通路有密切的关系。 【关键词】 羟基积雪草苷 去甲肾上腺素 一氧化氮合酶抑制剂 内皮细胞 胸主动脉 中药积雪草是伞形科植物积雪草Centella asiatica (L.) Urban的干燥全草，为各版《中国药典》收载品种，其主要活性成分为三萜皂苷类。有报道积雪草总苷具有抗溃疡［1］、治疗皮肤疾病［2］、抗焦虑［3］、免疫调节和诱导凋亡［4，5］等多种作用。 　　羟基积雪草苷(madecassoside，MC)是积雪草三萜皂苷类的主要成分之一。有关MC单体对心血管方面的作用未见报道。在本实验室前期研究中发现MC对NE预收缩的离体大鼠胸主动脉条有一定的舒张作用，但其作用机制尚不明确。利用离体动脉条模型，进一步探讨MC舒张血管的作用及其机制，为开发此类化合物提供一定的实验依据。 　　1 材料 　　MC（军事医学科学院放射与辐射医学研究所样品库）；重酒石酸去甲肾上腺素注射液（天津金耀氨基酸有限公司，批号0403311）；氯化乙酰胆碱（Acetylcholine Chloride，ACh，Sigma公司分装）；血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ，Sigma公司，批号064K51201）；L-N-硝基精氨酸甲酯（Nω-Nitro-L-arginine methyl ester hydrocholoride，L-NAME，Sigma公司，批号124K1212）；其它试剂均为分析纯，由军事医学科学院供应科提供。Krebs-Henseleit（K-H）液（mmol·L-1）配方：NaCl 133，KCl 4.75，MgCl2 1.25，CaCl2 1.5，NaHCO3 25，葡萄糖11.1，pH值7.4；无钙K-H液为正常的K-H液无CaCl2成分，加入0.01 mol·L-1EGTA。 　　清洁级Wistar大鼠，雌雄兼用，体重180～220 g，由军事医学科学院实验动物中心繁殖。 　　恒温灌流仪（北京军事医学科学院实验仪器厂，HX-10555）；张力换能器（高碑店市新航机电设备有限公司，JZ101）；MadLab生物医学信号采集处理系统（南京美易科技有限公司）。 　　2 方法 　　2.1 大鼠胸主动脉条的制备［6］取大鼠，麻醉后开胸迅速取出胸主动脉，将其剪成4～9 mm的环段，置于含10 ml K-H液的浴槽内，保持37 ℃并持续通入体积分数为95% O2和5% CO2的混合气体，前负荷为1.0 g，平衡1～2 h后开始实验，肌条张力通过张力换能器记录于生物医学信号采集处理系统。 　　2.2 对NE，KCl和AngⅡ收缩曲线的影响 累积浓度法作NE（10-9～10-5 mol·L-1）量效曲线，K-H液反复冲洗动脉条至张力恢复正常，加入MC作用10 min，在有MC存在的情况下重复上述NE的量效曲线，前后对照统计，MC分为0.02，0.04，0.08，0.16 mmol·L-1剂量组。同法作KCl（0.01 ～ 0.16 mol·L-1）和AngⅡ（10-11～10-6mol·L-1）量效曲线。 　　2.3 对NE诱导动脉条两相收缩的影响 标本于K-H液中平衡1～2 h，无钙K-H液反复冲洗30 min后，加入NE 10-7 mol·L-1引起动脉条第一相收缩，收缩稳定后加入CaCl2，以恢复无钙K-H液中的Ca2+浓度（1.5 mmol·L-1），引起第二相收缩，直至收缩达高峰坪值，两相收缩幅度之和作为100%，分别计算两相收缩所占收缩率。无钙K-H液反复冲洗标本，待其张力恢复正常后，加入MC作用10 min，在有MC存在的情况下重复上述过程，前后对照统计。MC分为0.02，0.04，0.08 mmol·L-1剂量组。 　　2.4 对内皮完整动脉条及去内皮动脉条作用的比较 机械摩擦法去除动脉条内皮细胞，加入ACh 10-6～10-4mol·L-1检测内皮细胞活性，无内皮动脉条加入ACh后，无舒张效应。同一动物获得的动脉条分别制作保留内皮