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寿聪胶囊对老年痴呆模型大鼠学习记忆及海马区ChAT影响 　 作者：牛彩琴 徐厚谦 张团笑 【摘要】 目的 观察寿聪胶囊对老年痴呆（AD）模型大鼠的学习记忆、海马区乙酰胆碱转移酶（ChAT）阳性细胞的表达及病理形态学影响，探讨寿聪胶囊的防治机制。方法 选用Wistar 雄性大鼠随机分成五组：对照组、模型组、脑复康组及寿聪胶囊低、高剂量组。用D半乳糖和东莨菪碱制备复合AD大鼠模型，应用中药复方制剂寿聪胶囊进行防治。用跳台法测试大鼠的学习记忆能力、免疫组化法观察海马区ChAT阳性细胞的表达变化、光镜下观察脑组织病理形态学的改变。结果 寿聪胶囊组跳台潜伏时间明显延长、触电错误次数显著减少，海马区ChAT的阳性细胞数目显著增多、且染色大多呈阳性，脑组织病理损害明显减轻；与模型组相比均有显著性差异(P＜0.01)，与脑复康组相似(P＞0.05)。结论 寿聪胶囊能提高AD大鼠学习与记忆能力，减轻脑组织的病理损害，可能与拮抗东莨菪碱所致胆碱能神经系统的功能损害，提高ChAT活性，促进Ach合成有关。 【关键词】 寿聪胶囊；老年性痴呆；东莨菪碱；D半乳糖；乙酰胆碱转移酶 现代医学尚缺乏对于AD有效的防治方法，近年大量临床报道，中药复方制剂对AD的防治有较好的临床效果〔1，2〕。中医认为肾虚精亏、痰瘀互阻是AD的主要发病机制，以“补肾填精、涤痰通络”为治法，配制中药复方制剂寿聪胶囊，经初步临床观察疗效较好，但其作用机制有待进一步研究。本实验选用Wistar大鼠，根据AD患者常见的胆碱能神经系统损害学说〔3〕，用D半乳糖和东莨菪碱制备AD复合模型〔4～6〕。通过行为学、ChAT及病理形态的观测，探讨寿聪胶囊对AD大鼠的防治机制，为临床应用提供理论支持。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物与分组 　　健康Wistar雄性大鼠（兰州大学医学实验中心提供）清洁级，体重(250±50)g，共40只。常规饲养1 w后，随机分为5组：对照组，模型组，脑复康组，寿聪胶囊低、高剂量组，每组8只。 　　1.2 药物与试剂 　　寿聪胶囊以何首乌、红参、岷当归、锁阳、三七、丹参、泽泻、石菖蒲等中药组方，按一定的剂量比例配制，生药粉碎研磨，由甘肃中医学院附属医院药剂科生产（批号：030102，0.5g/粒）；D半乳糖和东莨菪碱由上海恒信化学试剂有限公司提供（批号分别为 613K2102201）；脑复康由西安交大瑞鑫药业有限公司提供（乙酰胺吡咯烷酮，批号；乙酰胆碱转移酶（ChAT）免疫组化测定试剂盒由武汉博士德生物工程公司提供。 　　1.3 模型制备 　　在脑复康组和寿聪胶囊灌胃防治的第10天开始造模。除对照组用生理盐水外，其余各组每天颈背部注射D半乳糖0.96%（5 ml·kg-1·d-1）3 w后；改用腹腔注射东莨菪碱0.3 mg/ml（2 mg·kg-1·d-1）2 w。 　　1.4 给药方法 　　分组后第二天开始各组每天灌胃，除对照组和模型组用等量的生理盐水外，其余各组用相应的药物进行防治。脑复康组用脑复康290 g/L(2.9 g·kg-1·d-1) 灌胃，寿聪胶囊组分别用低剂量54 g/L (0.54 g·kg-1·d-1)和高剂量162 g/L(1.62 g·kg-1·d-1) 灌胃。共50 d。 　　1.5 主要实验仪器 　　跳台仪（由甘肃中医学院实验中心提供）、 AO病理切片机（兰州大学病理实验中心提供）、紫外分光光度计（型号：LIV12002，日本岛京仪器厂）；荧光分光广度仪（型号：RF5301PC，日本岛京）、照相显微镜（型号：Bx6032FB3F01，0LYMPUS）等。 　　1.6 观察指标 　　1.6.1 行为学检测 　　行为学测试用跳台法。分组后当天进行跳台训练：将大鼠放置在跳台仪内,适应环境5 min，每只大鼠训练5次，然后通电，大鼠逃到安全台上开始记时，至大鼠从安全台上跳下停止记时，此段时间为潜伏期，大鼠5 min内从安全台上跳下受到电击的次数为错误次数。训练后第二天进行防治前的跳台测试，在实验最后一次给药2 h后进行第二次跳台测试，记录各组大鼠的跳台潜伏时间和受到电击的错误次数。 　　1.6.2 ChAT免疫反应阳性细胞的检测 　　最后一次行为学测试后，当天禁食，第二天进行标本采集。依次将各组大鼠迅速处死，在冰台上取出脑组织，沿矢状缝切开，甲醛固定，石蜡包埋。在兰州大学病理实验中心，将每个标本的一半脑组织取海马做ChAT的免疫组化法检测，免疫组化的封片在照相显微镜下观察各组海马的ChAT免疫反应阳性细胞变化。 　　1.6.3 脑组织病理形态学的观察 　　每个标本的另一半脑组织作HE染色，镜下观察各组大鼠的病理形态学的变化。 　　1.7 统计学处理 　　所有数据用x±s表示，使