血管紧张素Ⅱ对KCNQ1%2fKCNE1钾通道蛋白表达调节.pdf

中文摘要 摘 要 延迟整流钾电流IK是人和哺乳动物的心室肌细胞动作电位主要的复 极外化向钾电流，其中包括两种电流成分：慢激活(Slow rectifier delayed rectifier potaSsi啪current，亿)和快激活(F乙apiddelayed potassium 外向电流。迄今发现的五种KCNE蛋白都能够对KCNQl通道功能起不同 的调节作用，其中KCNQl依CNEl异源表达形成慢激活、慢去激活、无 失活的电流，其电流动力学特征和药理学特征与心脏的IKs通道很相似。 上调引发的短QT综合征(SQT2)。同时，越来越多的证据显示，许多心 血管疾病状态下，如心肌肥厚，心衰等伴有IKS通道功能的下调，是获得 性LQT产生的重要原因之一。无论是复极延迟的LQT或是复极缩短的 SQT，都可能导致心律失常，特别是尖端扭转型室性心动过速，是高发心 源性猝死的危险。因此研究I飚通道功能调节具有重要的意义。 肾素一血管紧张素系统(rellin．an百otensm 管系统的正常生理功能以及高血压、心肌肥大、充血性心力衰竭等诸多心 血管的病理过程中具有重要作用。血管紧张素II(AngII)是其该系统的 主要体液因子，近年的研究表明AngII对心肌离子通道功能具有直接调控 作用。在先前我们的试验中，发现AngII通过激活ATl受体对豚鼠心室肌 细胞上IK。呈急性下调，已知ATl受体激动产生的效应包括急性作用(发 生在几分钟内)和慢性作用，后者常常为基因转录和转录后调节。然而 AngII对IK。通道的慢性调控作用尚不清楚。本研究用分子生物学、免疫 荧光显微镜等实验技术，在异源表达体人胚胎肾细胞(既怼93)上共表 对KCNQl依CNEl通道慢性调控作用，并分析了细胞内的信号转导通路 中文摘要 第一部分AngII对KCNQl通道蛋白表达的影响 目的：观察不同浓度及不同时间An茁I对KCNQl通道蛋白表达的影 响。 方法： 2000转染试剂瞬时共转染 在脏怼93细胞上运用Lipofectin 后，运用特异性抗标签抗体，westem blot技术检测AngII在不同浓度、不 同时间对KCNQl通道蛋白表达的影响。运用免疫荧光共聚焦显微镜技术 观察An出I对细胞膜上通道蛋白表达的影响。 结果：(1)AngII与细胞孵育24h可明显降低KCNQl蛋白含量， Ang 67％，；(2)Ang 白的下调出现在12小时；(3)免疫荧光实验进一步证实，给予Ang II(100州)24h后，细胞膜上的通道蛋白荧光强度明显减弱。 结论：在异源表达系统，长时间孵育AngII能够引起KCNQl通道蛋 白的表达量下降。 II作用的影响 第二部分PKC信号通路对Ang 目的：异源表达细胞线上分析An西I对KCNQl通道慢性调控作用的 细胞内信号转导通路。 方法：采用脂质体瞬时转染方法，在mK293细胞共转染带标签的 V5．KCNQl、KCNEl及人ATl受体cDNA24h后，运用特异性抗标签抗 体，westem II下调 blot技术检测观察使用PKC抑制剂或激动剂对Ang KCNQl通道蛋白表达的影响。 结果： (1)PKC抑制剂Bis．1(1oo枞)与细胞孵育30min后再加 II相比通道蛋白表达 入A呜Ⅱ(10011M)共同作用24h，与单独孵育Ang II的作用； (2)PKC 含量出现了明显增加现象，说明Bis．1可拮抗A