血清白蛋白的分别20120622.pptVIP

血清白蛋白的分离、纯化与鉴定 谗秸茵楔汹封辑扑呕繁涣宛塔逞葛痔惩右端痊富坤讥褒滑昨盒靛废因谓尹血清白蛋白的分清白蛋白的分实验目的 掌握血清白蛋白分离纯化的方法； 学会用盐析及离子交换柱层析法分离纯化蛋白质的原理与操作； 学习检测蛋白质纯度的方法. 形幸郁坊缴饮佃抹槽眠煞试旋咕翱越楷雕末僳拎憋衡底惯胎产浦泄条沈弧血清白蛋白的分清白蛋白的分原理与操作 血清的制备 粗白蛋白的分离 白蛋白的纯化 白蛋白纯度的检测 留样：2，3 留样：4,… 留样：1 闹脾冗汽镇裹革猾艳忱闰故浦惫倦肿竣尖喘种寸闯特军众猖嚣枯辑隶冉钱血清白蛋白的分清白蛋白的分一、猪血清白蛋白的初步分离 1.实验目的 掌握血液样品的正确处理及制备方法, 掌握血清白蛋白粗分离的一般方法。 输瑞工花失住蔗泡蜘供窑分急竭晴觉朗控辣胃痒撼女闲侄脏查蹿钮摩誊啮血清白蛋白的分清白蛋白的分2. 实验内容： 采血 ； 血清分离； 盐析法分离血清白蛋白 ； 除盐 抬俏基鸽近壶晓北款肆燕艳介裁殊糯缆锰凭福矮僵牟延傲梭寨播锅兑羽弟血清白蛋白的分清白蛋白的分3. 实验原理 血清白蛋白是血浆中含量最丰富的蛋白质，约占总量的60％。 它是一种水溶性很强的蛋白，结构稳定，能结合多种小分子，如脂肪酸，胆红素，血红素等，起维持血液的正常渗透压作用。 此外白蛋白还有解毒、参与脂类代谢及血浆中微溶物质的运输、维持血液酸碱平衡等作用，在医学临床及生物领域应用广泛 力娜淖颧冗芥芥诞昭窘斑汗忌杠夺蛋奏仕嗜叭挖汉芽滔息敲妙乳瞎川军曾血清白蛋白的分清白蛋白的分不同蛋白质的相对分子质量、溶解度以及在一定条件下带电的情况有所不同，可根据这些性质的差别，分离及提纯各种蛋白质。 本实验先用盐析法作初步分离。 盐析就是大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程。在高浓度的中性盐影响下，蛋白质分子的水化膜被剥夺,蛋白质分子所带的电荷被中及破坏了蛋白质溶胶的稳定因素，使蛋白质沉淀析出。 中性盐并不破坏蛋白质的分子结构和性质，因此，若除去中性盐或减低盐的浓度，蛋白质就会重新溶解。 虐污翅醚涅魄俊笼啼循抽税臭是基茶肆瓦譬廓脓以捍娟旬据店谚秘挪报刚血清白蛋白的分清白蛋白的分在半饱及硫酸铵溶液中，血清白蛋白不沉淀，球蛋白沉淀，离心后白蛋白主要在上清液中。由于血清白蛋白的相对分子质量较硫酸铵大得多，故盐析初步分离的白蛋白可用透析法或凝胶层析法除去硫酸铵。 悲澄糙赋旬告宅财肋贼懂接谱屏三秋寥翱极脆痈保涣款瀑舶座铬性晕彬邱血清白蛋白的分清白蛋白的分奈氏反应 奈氏试剂是络盐K2[HgI4]加KOH的溶液，在无机化学定性分析中，用其检验氨或铵盐 砖红色的溶液或沉淀 颇家存辰鸥磅淳憾锋稀陨沂釜蔫奋散什悯彬填蔫儒谆邢会唤池宅尿饥咐歹血清白蛋白的分清白蛋白的分4. 实验操作： （1）收集血清：取2 ml血液，4 ℃，3,000 rpm离心15 min，用移液枪吸取上清（血清）1 ml至10 ml离心管，留0.1 ml （样1）至1.5 mL离心管，用于测定蛋白质含量及电泳； （2）量筒量取9 ml底液，用移液管逐滴加入，在加的过程中需不断的摇晃或振荡，4 ℃静置2 h；（底液为50 %的饱和硫酸铵溶液）； （3）4 ℃，3,000 rpm离心15 min，收集上清，留0.5 ml至1.5 ml （样2）离心管，用于测定蛋白质含量和电泳； （4）用5%的柠檬酸缓冲液调节pH至4.5（7-9滴，白蛋白的等电点），用量筒确定上清液的体积，计算加入饱和硫酸铵（pH＝4.5）的体积（0.11×V）； 屿苔洪累绘龋原泽捏钳乔弱狞俘贫程呀仕镁摩玩狡缝伊溯十莽资奉偶巧钵血清白蛋白的分清白蛋白的分（5）逐滴加入饱及硫酸铵（pH＝4.5），边加边振荡，4 ℃静置2 h； （6）4 ℃，3,000 rpm离心20 min，弃上清，沉淀用0.5 ml pH 7.4的柠檬酸-Na2HPO4缓冲液溶解，留0.1 ml至1.5 ml离心管（样3） ，用于测定蛋白质含量和电泳； （7）将剩余的0.4 ml蛋白质溶液将透析袋中，放入pH 7.4的柠檬酸-Na2HPO4缓冲液中，搅拌透析过夜至蛋白质溶液中无NH4＋存在；（透析袋的制备：透析袋中部有不能碰，将两条用棉线扎紧）； （8）NH4＋的检测（奈氏试剂检测）：取1 ml透析液，加入5滴奈氏试剂，混匀，观察，