小型综述微生物核糖体工程研究进展.pdfVIP

MiniReview 小型综述 微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 49 (8) :981 - 986 ; 4 August 2009 ISSN 0001 - 6209 ; CN 11 - 1995Q http :journals. im. ac . cnactamicrocn 微生物核糖体工程研究进展 1 ,2 1 1 谢庶洁 , 肖静 ,徐俊 (1 国家海洋局生物遗传资源重点实验室 , 第三海洋研究所 ,厦门　361005) (2 厦门大学生命科学学院 ,厦门　361005) 摘要 :微生物获得特定类型的抗性突变 ,不仅反映了其核糖体或 RNA 多聚酶上相关靶位点结构的改变 ,也对 ( ) 突变菌株次级代谢产物 抗生素等 的生物合成能力产生深刻影响 , 因此筛选抗性突变株可作为微生物推理 选育的途径之一 。“核糖体工程”是利用微生物的各类抗性突变为筛选标记 ,高效获得次生代谢产物合成能 力提高的突变株的推理育种新方法 。本文综述了微生物“核糖体工程”的概念 、各类突变的作用机理 ,并着 重介绍组合抗性突变在提高出发菌株次级代谢产物产量方面的应用 。 关键词 : 核糖体工程 ; 抗生素抗性 ; 次级代谢 ; 微生物育种 中图分类号 :Q933 　　文献标识码 :A 　　文章编号 (2009) 　　微生物产生种类繁多的酶 、抗生素等生物活性 1 核糖体工程概要 物质 ,是人类利用最广泛的生物资源 。在野生型菌 株中各类 目标代谢产物的产量通常很低 ,微生物菌 抗生素生物合成一般发生在微生物细胞进入稳 株改良一直是重要的应用微生物学课题 。常规的微 定生长期时 ,其合成的启动与细菌中最重要的生长 生物诱变育种随机性高 、耗时费力 ,通过基因工程手 速率调节机制“严谨反应”密切相关[4 ] 。以 GDP 和 段已可实现单基因编码的酶类的定向进化并进行超 ATP 为底物 ,与核糖体 L 11 蛋白结合的pp Gpp 合成 ( ) 量表达 ,但对需要成簇基因编码的抗生素等天然产 酶 RelA 在相应生理条件下合成诱导“严谨反应”发 物的产量提高则困难重重 。 生的信号分子pp Gpp 。已有实验证明pp Gpp 通过结 Shima 等 于 1996 年 发 现 在 变 铅 青 链 霉 菌 合于 RNA 多聚酶来行使其在转录水平上的全局性 ( Strep tomy ces lividans ) 核糖体 S12 蛋 白的编码基 因 调控[5 ] ,且与核糖体的功能密切相关 。因此 ,对作用 rpsL 中引入某些点突变 ,可激活该菌株中沉默的抗 于 RNA 多聚酶 上的利福平等抗生素的抗性变化所 生素生物合成基因 ,导致放线紫红素的超量合成[ 1] 。 反映的 RNA 多聚酶功能突变必然会影响到细胞的 随后大量的研究表明 , 向微生物核糖体或 RNA 聚合 次级代谢过程 。 酶中引入特定的突变有助于其次级代谢产物产量的 核糖体是蛋白质的合成机器 , 也是细胞感知营 提高 。由于这些突变与出发菌株获得的药物抗性有 养水平和对生长速率进行调控的重要位点 。在稳定 关 ,故可以抗性突变为指针 ,建立一种简单易行的微 生长期 ,与次级代谢产物生物合成相关基因的大量 生