草甘膦人工抗原的制备及兔源多抗的ELISA鉴定.pdfVIP

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2017-11-06 发布于湖北
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草甘膦人工抗原的制备及兔源多抗的ELISA鉴定.pdf

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※生物工程食品科学 2017, Vol.38, No.04 65 草甘膦人工抗原的制备及兔源多抗的ELISA鉴定 1,2 2, * 1,* 1 1 1 1 1,2 2 王晶，王耀，王方雨，邓瑞广，胡骁飞，余秋颖，郝俊芳，邢云瑞，侯玉泽（1.河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室，河南郑州 450002 ； 2.河南科技大学食品与生物工程学院，畜禽疫病诊断与食品安全检测河南省工程实验室，河南洛阳 471023 ）摘要： 1- 3- -3- 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide 采用（二甲氨基丙基）乙基碳二亚胺（ hydrochloride EDC glutaraldehyde GA N -(phosphonomethyl) glycine ，）法和戊二醛（，）法，合成了草甘膦（， PMG ）人工抗原，通过免疫制备高敏感性、特异性的兔PMG多克隆抗血清并进行鉴定。将PMG分别与牛血清白蛋 bovine serum albumin BSA ovalbumin OVA PMG-BSA 白（，）和鸡卵清白蛋白（，）偶联，合成免疫抗原和包被抗原 PMG-OVA 。经紫外扫描、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定后，免疫新西兰大白兔，制备多抗。利用间接酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA ）方法测定多抗效价，间接竞争ELISA方法测定血清的 3 4 1 10 2 IC 敏感性和特异性。结果表明，免疫的只兔血清效价均达 ∶ 以上，号兔多抗效果最好，半数抑制浓度（） 50 为30.9 μg/mL ，且具备良好的特异性。本实验成功合成了PMG人工抗原，并制得了敏感性高、特异性好的兔多抗，为PMG 的免疫学快速检测方法的提供参考。关键词：草甘膦；人工抗原；多抗；酶联免疫吸附检测 Preparation of Artiﬁcial Antigen and ELISA Identiﬁcation of Rabbit Polyclonal Antiserum for the Detection of Glyphosate 1,2 2,* 1,* 1 1 1